专利名称：动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种药物残留检测器具，特别是涉及一种动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条。
背景技术：
现代畜牧业为人类提供了极其丰富的肉、禽、奶、蛋食品，而日趋严重畜禽食品的药物残留已对人体健康和生命构成了巨大的威胁和�：Γ┲�、畸形、抗药性、青少年性早熟、中老年心血管疾病等问题以及某些食物中毒，往往与畜禽食品中的抗生素、激素及其他合成药物的滥用与残留密切相关。
在动物疾病防治过程中，使用兽药、药物添加剂以及在饲料中加入某些药物，均可导致药物在动物性产品中的残留，而使用违禁药物所造成的残留其�：ψ畲�。国家虽然非常重视兽药残留的检测与监控工作，先后制定和发布了110种药物在动物性食品中的最高残留限量、残留检测方法以及其它技术事项，但我国在对动物制品的兽药残留检测和监控等方面都与发达国家仍有很大的差距，对饲料和兽药的检测只能停留在常规的检测上(蛋白质含量、钙磷含量、微量元素含量)，而对在饲料中添加药物，甚至是违禁药物所造成的药物残留，却难以得到有效的法律支持并缺乏监测手段。欧盟认为我国的药物残留标准虽已制订，但检测手段没有到位，没有具体的药物残留监控计划和实施方案，自1996年以来一直维持着禁止对我国畜禽产品进口。
发明内容
本发明的目的是研制出动物体及其产品药物残留快速检测试纸条I和II。本发明的技术方案是一种动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条I，含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条，反应试剂载体吸附层粘贴于支撑层上，吸附层由样品端依次为纤维层、吸附待检药物相应金标抗体(Wi)纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，以藕联待检药物的载体蛋白(Xi)溶液及羊或兔抗小鼠IgG抗体(Y)溶液别在纤维素膜上印制检测印迹“|”和对照印迹“|”。
不吸水支撑层片条可用硬质塑胶片条，或不吸水硬纸片条，纤维层可用玻璃棉，吸水材料层可用吸水纸，纤维素膜层可用硝酸纤维素膜，金标抗体纤维层可用金标抗体(Wi)玻璃棉，金标抗体(Wi)为胶体金标记的单克隆抗体(Mi)或多克隆抗体，藕联相应待检药物的载体蛋白(Xi)溶液为待检药物与载体蛋白藕联结合的复合溶液，载体蛋白Xi可为牛血清白蛋白(BSA)X1，或为鸡卵清白蛋白(OVA)X2，或为铁蛋白X3，或为血蓝蛋白X4等，在玻璃棉、金标抗体玻璃棉及吸水纸层上覆盖有塑胶保护膜，在玻璃棉与金标抗体(Wi)交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧约0.5cm处印制样品标记线，在纤维素膜上的检测印迹与对照印迹呈“‖”排列。吸附有待测某种药物相应的金标抗体(Wi)玻璃棉，藕联相应待检药物载体蛋白(Xi)溶液印制的检测印迹“|”可为下列药物中的一种青霉素金标抗体(W1)玻璃棉，藕联青霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，链霉素金标抗体(W2)玻璃棉，藕联链霉素载体蛋白溶液(Xi)印迹，土霉素金标抗体(W3)玻璃棉，藕联上霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，新霉素金标抗体(W4)玻璃棉，藕联新霉载体蛋白(Xi)溶液印迹，红霉素金标抗体(W5)玻璃棉，藕联红霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，四环素金标抗体(W6)玻璃棉，藕联四环素载体蛋白(Xi)溶液印迹，金霉素金标抗体(W7)玻璃棉，藕联金霉载体蛋白(Xi)溶液印迹，氯霉素金标抗体(W8)玻璃棉，藕联氯霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，庆大霉素金标抗体(W9)玻璃棉，藕联庆大霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，卡那霉素金标抗体(W10)玻璃棉，藕联卡那霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，诺氟沙星金标抗体(W11)玻璃棉，藕联诺氟沙星载体蛋白(Xi)溶液印迹，氧氟沙星金标抗体(W12)玻璃棉，藕联氧氟沙星载体蛋白(Xi)溶液印迹，环丙沙星金标抗体(W13)玻璃棉，藕联环丙沙星载体蛋白溶液印迹，杆菌肽金标抗体(W14)玻璃棉，藕联杆菌肽载体蛋白(Xi)溶液印迹，雌激素金标抗体(W15)玻璃棉，藕联雌激素载体蛋白(Xi)溶液印迹，甾体激素金标抗体(W16)玻璃棉，藕联甾体激素载体蛋白(Xi)溶液印迹，磺胺嘧啶金标抗体(W17)玻璃棉，藕联磺胺嘧啶载体蛋白(Xi)溶液印迹，磺胺异恶唑金标抗体(W18)玻璃棉，藕联磺胺异恶唑载体蛋白(Xi)溶液印迹，硝基咪唑金标抗体(W19)玻璃棉，藕联硝基咪唑载体蛋白(Xi)溶液印迹，硝基呋喃金标抗体(W20)玻璃棉，藕联硝基呋喃载体蛋白(Xi)溶液印迹，克球粉金标抗体(W21)玻璃棉，藕联克球粉载体蛋白(Xi)溶液印迹，黄曲霉毒素金标抗体(W22)玻璃棉，藕联黄曲霉毒素载体蛋白(Xi)溶液印迹，烟曲霉毒素金标抗体(W23)玻璃棉，藕联烟曲霉毒素载体蛋白(Xi)印迹。
一种动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条II，含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条、反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，吸附层由样品端依次为纤维层，吸附藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)纤维层，纤维素膜层，手柄端吸水材料层，以待检药物相应抗体(Wi)和抗载体蛋白(Xi)抗体溶液分别在纤维素膜上印制检测印迹“|”和对照印迹“|”。
不吸水支撑层片条可为硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸片条，纤维层可为玻璃棉，吸水材料层可用吸水纸，纤维素膜层可用硝酸纤维素膜，金标纤维层可用藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)玻璃棉，藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)为胶体金标记的藕联待检药物的载体蛋白，载体蛋白可为牛血清白蛋白(BSA)X1，或为鸡卵清白蛋白的(OVA)X2，或为铁蛋白X3，或为血蓝蛋白X4等，在玻璃棉，藕联相应待检药物的金标载体蛋白(Xi)玻璃棉及吸水层上履盖有保护膜，在玻璃棉和金标玻璃棉交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧约0.5cm处印制样品标记线，在纤维素膜层上的检测印�：投哉沼〖５淖楹希帕锌晌啊�。
吸附有藕联待检药物的金标载体蛋白Xi玻璃棉，待检测药物相应的抗体(Wi)溶液印制检测印迹“|”，可为下列药物中的一种藕联青霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，青霉素抗体Wi溶液印迹，藕联链霉素金标体蛋白Xi玻璃棉，链霉素抗体W2溶液印迹，藕联土霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，土霉素抗体W3溶液印迹，藕联新霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，新霉素抗体W4溶液印迹，藕联红霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，红霉素抗体W5溶液印迹，藕联四环素金标载体蛋白Xi玻璃棉，四环素抗体W6溶液印迹，藕联金霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，金霉素抗体W7溶液印迹，藕联氯霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，氯霉素抗体W8溶液印迹，藕联庆大霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，庆大霉素抗体W9溶液印迹，藕联卡那霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，卡那霉素抗体W10溶液印迹，藕联诺氟沙星金标载体蛋白Xi玻璃棉，诺氟沙星抗体W11溶液印迹，藕联氧氟沙星金标载体蛋白Xi玻璃棉，氧氟沙星抗体W12溶液印迹，藕联环丙沙星金标载体蛋白Xi玻璃棉，环丙沙星抗体W13溶液印迹，藕联杆菌肽金标载体蛋白Xi玻璃棉，杆菌肽抗体W14溶液印迹，藕联雌激素金标载体蛋白Xi玻璃棉，雌激素抗体W15溶液印迹，藕联甾体激素金标载体蛋白Xi玻璃棉，甾体激素抗体W16溶液印迹，藕联磺胺嘧啶金标载体蛋白Xi玻璃棉，磺胺嘧啶抗体W17溶液印迹，藕联磺胺异恶唑金标载体蛋白Xi玻璃棉，磺胺异恶唑抗体W18溶液印迹，藕联硝基咪唑金标载体蛋白Xi玻璃棉，硝基咪唑抗体W19溶液印迹，藕联硝基呋喃金标载体蛋白Xi玻璃棉，硝基呋喃抗体W20溶液印迹，藕联克球粉金标载体蛋白Xi玻璃棉，克球粉抗体W21溶液印迹，藕联黄曲霉毒素金标载体蛋白Xi玻璃棉，黄曲霉毒素抗体W22溶液印迹，藕联烟曲霉毒素金标载体蛋白Xi玻璃棉，烟曲霉毒素抗体W23溶液印迹。
本发明有益的积极效果1.动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条广泛用于下列各类药物残留的快速检测。
磺胺类、硝基呋喃类、硝基咪唑类、大环内酯类、喹恶啉类、四环素类、氨基糖甙类和β-内酰胺类；如青霉素、链霉素、土霉素、新霉素、红霉素、四环素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、杆菌肽、雌激素、甾体激素、磺胺嘧啶、磺胺异恶唑、硝基咪唑、硝基呋喃、克球粉、黄曲霉毒素、烟曲霉毒素。
引起动物性产品中药物残留并危害人体健康的药物的品种主要有违禁药物和未被批准使用的药品，如激素、甲状腺抑制剂、玉米赤霉醇和镇静类药物等；人畜共用的抗菌类药物，如磺胺类、硝基呋喃类、硝基呋喃唑类、大环内酯类、喹恶啉类、四环素类、氨基糖甙类和β-内酰胺类；其它诸如允许使用的药物品种，但未能遵守休药期的规定，如青霉素、氯霉素、卡那霉素、庆大霉索、喹诺酮类药物。
2、药物残留快速检测试纸条具有下列各项优点(1)特异性强、敏感性高。快速检测试纸条以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体(Mi)为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对单克隆抗体(Mi)的特异性和亲和力影响很�。揖哂薪细叩谋昙锹�。因此，快速检测试纸条具有较高的特异性和敏感性。敏感性以中华人民共和国农业部制定的指标为准，即农牧发17号关于发布《动物性食品中兽药最高残留限量》的通知，检出最低限量为通知规定的最高残留限量，即高于最高残留限量或等于最高残留限量均可检出，低于最高残留限量时则不能检出。
(2)操作简便快速。使用快速检测试纸条时无需任何其它试剂，只要将其插入待检测样品10秒左右，在2分钟内即可判定结果。
(3)显示检测结果形象、直观准确。快速检测试纸条以显示红棕色“|”及“‖”印迹作为检测的阳性和阴性标记，即在纤维素膜上显示一条棕红色“|”印迹表示在样品中检出待检药物超标残留，两条棕红色“‖”印迹表示在样品中没有检出待检药超标残留，结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。
(4)成本低，投资少。使用快速检测试纸条，不需另配仪器设备及其它试剂，使现场检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。
(5)易于推广应用。快速检测试纸条操作简便，无需预先培训，人人均可操作，而且可以进行现场检测，适合我国检疫、监测国情。
快速检测试纸条广泛适用于从事专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、畜产品加工、集约化养殖到个体养殖等各层次的需求，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。
图1动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条(I)结构示意图；图2动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条(I)俯视结构示意图；图3动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条(II)结构示意图4动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条(II)俯视结构示意图；(五)具体实施例动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条可广泛应用于多种残留药物、抗生素、激素等的快速检测，如青霉素、链霉素、土霉素、红霉素、四环素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、杆菌肽、雌激素、甾体激素、磺胺嘧啶、磺胺异恶唑、硝基咪唑、硝基呋喃、克球粉、黄曲霉毒素、烟曲霉毒素等。
制备动物体及其产品中某种药物残留快速检测试纸条，首先需制备藕联该种药物的载体蛋白，用于印制检测印迹，进而制备相应的该种药物的金标抗体，用于制备该种药物的金标抗体纤维，其次需制备羊或兔抗小鼠IgG抗体，用于印制对照印迹。
(1)藕联某种药物的载体蛋白(Xi)的制备采用碳化二亚胺法、重氮化法或戊二醛法，将相应待检药物与载体蛋白进行藕联制备免疫抗原。将5mg药物溶于预冷的PBS溶液中，然后加入载体蛋白，加入比为载体蛋白每50个氨基酸加入1分子的藕联药物，置于通风柜中磁力搅拌器上搅拌，缓慢加入等体积的0.2％的戊二醛PBS溶液，室温搅拌1小时，加入1M的甘氨酸PBS溶液终浓度为200mM，继续搅拌1小时，用PBS液透析过夜，换液4次，除去载本蛋白和多余的药物。
(2)抗某种药物单克隆抗体(Mi)的制备以50μg-100μg/只的藕联某种药物载体蛋白免疫BALB/c系小鼠三次，每次间隔15-30天；第三次加强免疫后3-4天，将免疫小鼠眼球放血，拉颈致死，于75％酒精浸泡5-10min，无菌取其脾脏，剪碎并经100目尼龙网过滤，1000r/min离心10min，收集脾细胞；将1×108的脾细胞与2-5×107的NSO浆细胞瘤细胞混合，1000r/min离心10min弃上清，细胞沉淀于37℃水浴中缓缓加入0.7-1ml的40％-50％PEG4000(pH8.5-9.0)作用1min，然后缓慢加入无血清1640培养基15ml，以终止PEG的作用，37℃水浴5-10min，1000r/min离心10min弃上清，将细胞沉淀重悬于HAT选择培养基中，并加入96孔培养板(100μl-200μl/孔)，置37℃5％CO2培养箱中培养。培养7-10天后，以5μg-10μg/ml的藕联该种药物载体蛋白包被酶标板(40孔/块)，以酶免疫吸附试验(ELISA)检测杂交瘤的培养上清，挑取强阳性细胞克隆(OD492＝0.8以上)，进行连续三次的有限稀释法克降化，所产生的杂交瘤细胞染色体数为92-98，其分泌的单克隆抗体(Mi)特异地与该种药物反应，而不与其它无关蛋白发生交叉反应，亲和力常数达109-10，轻链亚型为κ或λ，重链亚型为IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3，针对该种药物特异抗原决定簇的单克隆抗体(Mi)，用于制备金标抗体棉。上述制备方法适用于任一种药物单克隆抗体(Mi)的制备。
(3)某种药物金标抗体(Wi)或藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)玻璃棉的制备以柠檬酸钠还原法制备金溶胶，即在沸腾的50-100ml0.01％-0.05％氯金酸水溶液中加入2-4ml的0.5％～2％柠檬酸三钠溶液，获得直径15nm左右的胶体金。以0.1mol/LK2CO3调胶体金pH至8.5-9.5，以1∶1000～1∶3000的标记比将待标记的某种药物的单克隆抗体(Mi)加入pH8.5-9.5金溶胶中，标记10min后，加20％PEG10000至终浓度0.05％，4℃500-3000g离心20imn，除去未结合的金颗粒。4℃15000g离心1h，弃上清，获初步纯化金标蛋白质混合物后，用丙烯葡聚糖S-400柱层析，分离纯化金标蛋白质，获得某种药物胶体金标记抗体。将1∶50～1∶400稀释的胶金标记抗体吸附于精制玻璃棉中，4℃低温真空干燥，制备某种药物金标抗体棉，本制备方法适用于任何一种药物金标抗体棉的制备和藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)玻璃棉的制备。
(4)羊或兔抗小鼠IgG抗体或抗载体蛋白(Xi)抗体的制备以饱和硫酸铵提取小鼠血清IgG蛋白，取1份小鼠血清加2份PBS(7.2)混匀，加等体积饱和硫酸铵混匀，置4℃冰箱2h，4℃12000r/min离心15min，弃上清；以适量PBS(7.2)溶解沉淀，加饱和硫酸铵至终浓度33％，置4℃冰箱2h，4℃12000/rmin离心15min，弃上清，以少量PBS(7.2)溶解沉淀，置4℃冰箱在PBS(7.2)中过夜透析，换液2-3次，4℃12000r/min15min离心15min，收集上清，以紫外分光光度计测定其蛋白浓度，以50μg-100μg/kg体重的小鼠血清IgG蛋白经皮下和肌肉注射免疫健康羊或家兔3-4次末次免疫10天后，静脉采血，以ELISA测定其血清抗体效价在1∶2000以上，心脏采血或颈动脉放血，收集其高免血清，以饱和硫酸铵提取羊或兔抗小鼠IgG以及抗载体蛋白(Xi)抗体(方法与提取小鼠血清IgGSH相同，不重述)用于任何一种药物残留快速检测试纸条对照显示印迹的制备。
(5)药物残留快速检测试纸条实施结构参见图1，2，图中1为支撑层用不吸水薄片条，实施中可采用塑胶薄片条或采用不吸水的硬质片材，反应试剂载体吸附层由2、3、4、5，组合而成，从样品端2开始，到手柄端5依次粘贴在支撑层1上面，其中2为样品端纤维层，实施中可使用玻璃纤维简称玻璃棉，3为吸附有某种待检药物金标抗体(Wi)纤维层或吸附藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)玻璃棉，可采用精制玻璃纤维棉，简称为金标抗体棉，4为纤维素膜层，实施中可采用硝酸纤维素膜，5为手柄端吸水材料层，采用吸水纸，如滤纸或其它吸水纸均可，试纸条总长8cm，宽度0.4cm，6为用藕联某种药物载体蛋白(Xi)溶液或待检药物抗体溶液在纤维素膜上印迹“|”，7为用羊或兔抗小鼠IgG抗体(Y)溶液或抗载体蛋白(Xi)抗体溶液在纤维素膜上印制的对照印迹“|”，组合印迹为“‖”。
8为保护膜，覆盖在玻璃棉及金标抗体(Wi)玻璃棉的保护膜为8-1，覆盖在吸水层滤纸上的保护膜为8-2。在玻璃棉和金标抗体(Wi)玻璃棉交界处对应位置的白色保护膜上偏向玻璃棉一方0.5cm处保护膜上印有一条标记线9，在9线右边印有箭头及max字样，手柄端保护膜可用黄色或其它颜色，2、3、4、5各层彼此之间交界处纤维互相交叉渗透。
(6)药物残留快速检测试纸条实施检测反应原理当金标纤维层吸附物为待检药物相应金标抗体Wi时，则药物残留快速检测试纸条(I)样品端插入待检测样品溶液后，待检溶液通过虹吸带动某种待检药物及金标抗体棉中的金标抗体(Wi)一起向硝酸纤维素膜扩散，并最终渗入滤纸中，在扩散过程中某种待检药物可与该种药物的金标抗体(Wi)相结合，进而封闭金标抗体(Wi)上该种药物的抗原结合位点，阻止金标抗体(Wi)与纤维素膜上藕联该种药物载体蛋白(Xi)的检测印迹结合，不能显示红棕色检测印迹，而羊或兔抗小鼠IgG抗体(Y)则可与金标抗体(Wi)结合，形成红棕色对照印迹“|”，即一条红棕色“|”印迹为阳性标记，反之样品溶液中无某种待检药物，则不能阻止金标抗体“Wi”与纤维素膜上藕联该种药物载体蛋白“Xi”检测印迹结合，显示红棕色检测印迹“|”，同时羊或兔抗小鼠IgG抗体(Y)也与金标抗体(Wi)结合，显示红棕色对照印迹“|”，形成两条红棕色“‖”阴性标记。当金标纤维层吸附物为藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)时，则药物残留快速检测试纸条(II)样品端插入待检测样品溶液后，待检溶液通过虹吸带动某种待检药物及藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)一起向硝酸纤维膜扩散，样品中的待检药物与藕联载体蛋白待检药物竞争性与纤维素膜上待检药物相应抗体(Wi)的检测印迹结合，阻止藕联载体蛋白待检药物与纤维膜上待检药物相应抗体(Wi)的检测印迹结合，不能显示红棕色检测印迹“|”，而藕联待检药物的金标载体蛋白(xi)可以与抗载体蛋白的抗体结合，显示红棕色检测印迹“|”，即一条红棕色“|”印迹为阳性标记，反之样品溶液中无某种待检药物，则不能阻止藕联药物与纤维膜上待检药物相应抗体(Wi)的检测印迹结合，显示红棕色检测印迹“|”，同样藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)可以与抗载体蛋白的抗体结合，显示红棕色对照印迹“|”，形成两条红棕色“‖”阴性标记。如果纤维素膜上没有红棕色标记显示，则表明试纸条已失效。为了降低试纸条的敏感性，提高检出最低限量的数值，使其最低检出量符合农业部规定的最高残留限量，因此在制备试纸条的金标抗体棉时，降低金标抗体的稀释比例，由1∶500降为1∶50～1∶400，由于金标抗体的增加，则需要高于国家最高残留限量的药物时才能封闭金标抗体，阻止金标抗体(Wi)与检测印迹结合，不显示检测印迹，表明为阳性，不能食用；当药物残留量低于国家规定的指标时，则样品中的药物不能封闭金标抗体，金标抗体仍能与纤维素膜藕联该种药物载体蛋白(Xi)的检测印迹结合，则显示检测印迹，表明为阴性，可以食用。另外一种方法是稀释检测样品，测出结果后换算出样品中药物的含量，然后确定是否可以食用。随着国家标准的改变，可以改变金标抗体的稀释比例，从而提高敏感性。
(7)药物残留快速检测试纸条实施例检测方法检测样品液的制备，检测肉及制品可将样品剪碎、研磨，以生理盐水制成1∶2-1∶10待检样品悬液，蛋和奶可直接用生理盐水制成1∶2-1∶10待检测样品悬液。
将相应的药物残留快速检测试纸条样品端插入待检样品溶液，插入深度不要超过标记线9，约5秒后取出检测试纸条，水平放置约2分钟，观察结果。
结果判定如果在纤维素膜上有一条红棕色标记“|”显示，表示检测结果为阳性，即在所检样品中检出某种药物残留，如果纤维素膜上有两条红棕色标记“‖”显示，表示检测结果为阴性，即在所检样品中未检出某种药物，如果纤维素膜上没有红棕色标记显示，则表明试纸条已失效。
实施例一和二、动物及其产品青霉素残留快速检测纸条(I)和(II)，参见图1，2，3，4，先参照上述实施例(1)制备藕联青霉素的载体蛋白(X1)溶液，按(2)制备青霉素单克隆抗体W1，按(3)制备青霉素金标抗体W1和金标抗体(W1)棉或藕联青霉素的金标载体蛋白(X1)和藕联青霉素的金标载体蛋白(Xi)玻璃棉，按(4)制备羊或兔抗小鼠IgG抗体或载体蛋白抗体，动物及其产品中青霉素残留快速检测试纸条(I)和(II)，参见图1，2，3，4，图中1为支撑层，采用不吸水塑胶薄片条或不吸水的硬质片条，反应试剂载体吸附层由2，3-1，4，5组成，粘贴在支撑层1上，从样品端2开始为玻璃棉纤维层，3-1为青霉素金标抗体W 1玻璃棉纤维层或3-2为藕联青霉素的金标载体蛋白(Xi)玻璃棉纤维层，即金标玻璃棉，4为纤维素膜层，采用硝酸纤维素膜，5为手柄端吸水材料层，采用吸水滤纸，试纸条总长约8cm，宽约0.4cm，6-1为用藕联青霉素载体蛋白(Xi)溶液或6-2青霉素抗体W1溶液在纤维素膜层上印制的检测印迹“|”，7-1为用羊或兔抗小鼠IgG抗体(Y)或7-2为抗载体蛋白抗体(Xi)在纤维素膜上印制的对照印迹“|”。
8-1为覆盖玻璃棉及金标玻璃棉上的白色保护膜，8-2为覆盖在吸水层滤纸上的黄色保护膜，在玻璃棉2和金标玻璃棉交界处对应位置偏向玻璃棉2一侧约0.5cm处的保护膜8-1上印有一条标记线9，在线9右边印有箭头及max字样，2，3-1或3-2，4，5各层彼此之间交界处应互相交叉渗透。
按实施例中(7)方法步骤进行检测，先制备待检测溶液，如检测牛肉，先把牛肉剪碎，研磨，以生理盐水制成1∶2～1∶10待检牛肉样品悬液。将动物体及其产品中的青霉素残留快速检测试纸条，样品端插入待检牛肉样品悬液中，插入深度不要超过标记线9，约5秒后取出检测试纸条，水平放置约2分钟观察结果。
结果判断若在试纸条的素膜上有一条红棕色标记“|”显示，表示检测结果为阳性即在所检测样品中，青霉素残留超标，如果纤维素膜层上有两条红棕色标记“‖”显示，表示检测结果为阴性，表示所检测样品中，青霉素残留不超标，如果纤维素膜上没有红棕色标记显示，则表明试纸条已失效，不能使用。
实施例三和四、动物体及其产品链霉素快速检测试纸条(I)和(II)，参见图1，2，3，4，本实施例试纸条的结构，制作方法，检测及结果观察显示与实施例一和二类似，不详细重述。有点不同的是3-1为链霉素金标抗体(W2)或3-2为藕联链霉素的金标载体蛋白，6-1为藕联链霉素的载体蛋白(Xi)或3-2为抗链霉素的抗体(W2)检测印迹“|”。
实施例五和六，动物体及其产品土霉素快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为土霉素金标抗体(W3)或3-2为藕联上霉素的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联土霉素的载体蛋白(Xi)或6-2为抗土霉素的抗体(W3)检测印迹“|”。
实施例七和八，动物体及其产品新霉素快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为新霉素金标抗体(W4)或3-2为藕联新霉素的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联新霉素的载体蛋白(Xi)或6-2为抗霉素的抗体(W4)检测印迹“|”。
实施例九和十，动物体及其产品红霉素快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为红霉素金标抗体(W5)或3-2为藕联红霉素的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联红霉素的载体蛋白(Xi)或6-2为抗红霉素的抗体(W5)检测印迹“|”。
实施例十一和十二，动物体及其产品四环素快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同是3-1为四环素金标抗体(W6)或3-2为藕联四环素的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联四环素载体蛋白(Xi)或6-2为抗四环素的抗体(W6)检测印迹“|”。
实施例十三和十四，动物体及其产品金霉素快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为金霉素金标抗体(W7)或3-2为藕联的金霉素金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联金霉素的载体蛋白(Xi)或6-2为抗金霉素的抗体(W7)检测印迹“|”。
实施例十五和十六，动物体及其产品氯霉系快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为氯霉素金标抗体(W8)或3-2为藕联氯霉素的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联氯霉素的载体体蛋白(Xi)或6-2为抗氯霉素的抗体(W8)检测印迹“|”。
实施例十七和十八，动物体及其产品庆大霉快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为庆大霉素金标抗体(W9)或3-2为藕联庆大霉素的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联庆大霉素的载体蛋白(Xi)或6-2为抗庆大霉素的抗体(W9)检测印迹“|”。
实施例十九和二十，动物体及其产品卡那霉素快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为卡那霉素金标抗体(W10)或3-2为藕联卡那霉素的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联卡那霉素的载体蛋白(Xi)或6-2为抗卡那霉素的抗体(W10)检测印迹“|”。
实施例二十一和二十二，动物体及其产品诺氟沙星快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为诺氟沙星金标抗体(W11)或3-2为藕联诺氟沙星的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联诺氟沙星的载体蛋白(Xi)或6-为抗诺氟沙星的抗体(W11)检测印迹“|”。
实施例二十三和二十四，动物体及其产品氧氟沙星快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为氧氟沙星金标抗体(W12)或3-2为藕联氧氟沙星的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联氧氟沙星的载体蛋白(Xi)或6-2为抗氧氟沙星的抗体(W12)检测印迹“|”。
实施例二十五和二十六，动物体及其产品环丙沙星快速检测试纸条(I)和(II)，类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为环丙沙星金标抗体(W13)或3-2为藕联环丙沙星的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联环丙沙星的载体蛋白(Xi)或6-2为抗环丙沙星的抗体(W13)检测印迹“|”。
实施例二十七和二十八，动物体及其产品杆菌肽快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一，不重述。有些不同的是3-1为杆菌肽金标抗体(W14)或3-2为藕联杆菌肽的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联杆菌肽的载体蛋白(Xi)或6-2为抗杆菌肽的抗体(W14)检测印迹“|”。
实施例二十九和三十，动物体及其产品雌激素快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为雌激素金标抗体(W15)或3-2为藕联雌激素的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联雌激素的载体蛋白(Xi)或6-2为抗雌激素的抗体(W15)检测印迹“|”。
实施例三十一和三十二，动物体及其产品甾体激素快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施一，不重述。有些不同的是3-1为甾体激素金标抗体(W16)或3-2为藕联甾体激素的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联甾体激素的载体蛋白(Xi)或6-2为抗甾体激素的抗体(W16)检测印迹“|”。
实施例三十三和三十四，动物体及其产品磺胺嘧啶快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为磺胺嘧啶金标抗体(W17)或3-2为藕联磺胺嘧啶的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联磺胺嘧啶的载体蛋白(Xi)或6-2为抗磺胺嘧啶的抗体(W17)检测印迹“|”。
实施例三十五和三十六，动物体及其产品磺胺异恶唑快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为磺胺异恶唑金标抗体(W18)或3-2为藕联磺胺异恶唑的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联磺胺异恶唑的载体蛋白(Xi)或6-2为抗磺胺异恶唑的抗体(W18)检测印迹“|”。
实施例三十七和三十八，动物体及其产品硝基咪唑快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为硝基咪唑金标抗体(W19)或3-2为藕联硝基咪唑的金标载体蛋白 (Xi)，6-1为藕联硝基咪唑的载体蛋白(Xi)或6-2为抗硝基咪唑的抗体(W19)检测印迹“|”。
实施例三十九和四十，动物体及其产品硝基呋喃快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为硝基呋喃金标抗体(W20)或3-2为藕联硝基呋喃的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联硝基呋喃的载体蛋白(Xi)或6-2为抗硝基呋喃的抗体(W20)检测印迹“|”。
实施例四十一和四十二，动物体及其产品克球粉快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为克球粉金标抗体(W21)或3-2为藕联克球粉的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联克球粉的载体蛋白(Xi)或6-2为抗克球粉的抗体(W21)检测印迹“|”。
实施例四十三和四十四，动物体及其产品黄曲霉毒素快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为黄曲霉毒素金标抗体(W22)或3-2为藕联黄曲霉毒素的金标载体蛋白(Xi)，6为藕联黄曲霉毒素的载体蛋白(Xi)或6-2为抗黄曲霉毒素的抗体(W22)检测印迹“|”。
实施例四十五和四十六，动物体及其产品烟曲霉毒素快速检测试纸条(I)和(II)。类同实施例一和二，不重述。有些不同的是3-1为烟曲霉毒素金标抗体(W23)或3-2为藕联烟曲毒素的金标载体蛋白(Xi)，6-1为藕联烟曲霉毒素的载体蛋白(Xi)或6-2为抗烟曲霉毒的抗体(W23)检测印迹“|”。
权利要求
1.一种动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条I，含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条，反应试剂载体吸附层粘贴于支撑层上，其特征是吸附层由样品端依次为纤维层、吸附待检药物相应金标抗体(Wi)纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，以藕联待检药物的载体蛋白(Xi)溶液及羊或兔抗小鼠IgG抗体(Y)溶液分别在纤维素膜上印制检测印迹“|”和对照印迹“|”。
2.根据权利要求1所述的检测试纸条I，其特征是不吸水支撑层片条可用硬质塑胶片条，或不吸水硬纸片条，纤维层可用玻璃棉，吸水材料层可用吸水纸，纤维素膜层可用硝酸纤维素膜，金标抗体纤维层可用金标抗体(Wi)玻璃棉，金标抗体(Wi)为胶体金标记的单克降抗体(Mi)或多克隆抗体，藕联相应待检药物的载体蛋白(Xi)溶液为待检药物与载体蛋白藕联结合的复合溶液，载体蛋白xi可为牛血清白蛋白(BSA)X1，或为鸡卵清白蛋白(OVA)X2，或为铁蛋白X3，或为血蓝蛋白X4等，在玻璃棉、金标抗体玻璃棉及吸水纸层上覆盖有塑胶保护膜，在玻璃棉与金标抗体(Wi)交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧约0.5cm处印制样品标记线，在纤维素膜上的检测印迹与对照印迹呈“‖”排列。
3.根据权利要求1或2所述的检测试纸条I，其特征是吸附有待测某种药物相应的金标抗体(Wi)玻璃棉，藕联相应待检药物载体蛋白(xi)溶液印制的检测印迹“|”可为下列药物中的一种青霉素金标抗体(W1)玻璃棉，藕联青霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，链霉素金标抗体(W2)玻璃棉，藕联链霉素载体蛋白溶液(Xi)印迹，土霉素金标抗体(W3)玻璃棉，藕联土霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，新霉素金标抗体(W4)玻璃棉，藕联新霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，纤霉素金标抗体(W5)玻璃棉，藕联红霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，四环素金标抗体(W6)玻璃棉，藕联四环素载体蛋白(Xi)溶液印迹，金霉素金标抗体(W7)玻璃棉，藕联金霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，氯霉素金标抗体(W8)玻璃棉，藕联氯霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，庆大霉素金标抗体(W9)玻璃棉，藕联庆大霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，卡那霉素金标抗体(W10)玻璃棉，藕联卡那霉素载体蛋白(Xi)溶液印迹，诺氟沙星金标抗体(W11)玻璃棉，藕联诺氟沙星载体蛋白(Xi)溶液印迹，氧氟沙星金标抗体(W12)玻璃棉，藕联氧氟沙星载体蛋白(Xi)溶液印迹，环丙沙星金标抗体(W13)玻璃棉，藕联环丙沙星载体蛋白溶液印迹，杆菌肽金标抗体(W14)玻璃棉，藕联杆菌肽载体蛋白(Xi)溶液印迹，雌激素金标抗体(W15)玻璃棉，藕联雌激素载体蛋白(Xi)溶液印迹，甾体激素金标抗体(W16)玻璃棉，藕联甾体激素载体蛋白(Xi)溶液印迹，磺胺嘧啶金标抗体(W17)玻璃棉，藕联磺胺嘧啶载体蛋白(Xi)溶液印迹，磺胺异恶唑金标抗体(W18)玻璃棉，藕联磺胺异恶唑载体蛋白(Xi)溶液印迹，硝基咪唑金标抗体(W19)玻璃棉，藕联硝基咪唑载体蛋白(Xi)溶液印迹，硝基呋喃金标抗体(W20)玻璃棉，藕联硝基呋喃载体蛋白(Xi)溶液印迹，克球粉金标抗体(W21)玻璃棉，藕联克球粉载体蛋白(Xi)溶液印迹，黄曲霉毒素金标抗体(W22)玻璃棉，藕联黄曲霉毒素载体蛋白(Xi)溶液印迹，烟曲霉毒素金标抗体(W23)玻璃棉，藕联烟曲霉毒素载体蛋白(Xi)印迹。
4.一种动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条II含有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条、反应试剂载体吸附层固定在支撑层上，其特征是吸附层由样品端依次为纤维层，吸附藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)纤维层，纤维素膜层，手柄端吸水材料层，以待检药物相应抗体(Wi)和抗载体蛋白(Xi)抗体分别在纤维素膜上印制检测印迹“|”和对照印迹“|”。
5.根据权利要求4所述的试纸条II，其特征是不吸水支撑层片条可为硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸片条，纤维层可为玻璃棉，吸水材料层可用吸水纸，纤维素膜层可用硝酸纤维素膜，金标纤维层可用藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)玻璃棉，藕联待检药物的金标载体蛋白(Xi)为胶体金标记的藕联待检药物的载体蛋白，载体蛋白可为牛血清白蛋白(BSA)X1，或为鸡卵清白蛋白的(OVA)X2，或为铁蛋白X3，或为血蓝蛋白X4等，在玻璃棉，金标载体蛋白(Xi)玻璃棉及吸水层上履盖有保护膜，在玻璃棉和金标载体玻璃棉交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧约0.5cm处印制样品标记线，在纤维素膜层上的检测印�：投哉沼〖５淖楹希帕锌晌啊�。
6.根据权利要求4或5所述的试纸条II，其特征是吸附有藕联待检药物的金标载体蛋白Xi玻璃棉，待检测药物相应的抗体(Wi)溶液印制检测印迹“|”，可为下列药物中的一种藕联青霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，青霉素抗体W1溶液印迹，藕联链霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，链霉素抗体W2溶液印迹，藕联土霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，土霉素抗体W3溶液印迹，藕联新霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，新霉素抗体W4溶液印迹，藕联红霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，红霉素抗体W5溶液印迹，藕联四环素金标载体蛋白Xi玻璃棉，四环素抗体W6溶液印迹，藕联金霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，金霉素抗体W7溶液印迹，藕联氯霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，氯霉素抗体W8溶液印迹，藕联庆大霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，庆大霉素抗体W9溶液印迹，藕联卡那霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，卡那霉素抗体W10溶液印迹，藕联诺氟沙星金标载体蛋白Xi玻璃棉，诺氟沙星抗体W11溶液印迹，藕联氧氟沙星金标载体蛋白Xi玻璃棉，氧氟沙星抗体W12溶液印迹，藕联环丙沙星金标载体蛋白Xi玻璃棉，环丙沙星抗体W13溶液印迹，藕联杆菌肽金标载体蛋白Xi玻璃棉，杆菌肽抗体W14溶液印迹，藕联雌激素金标载体蛋白Xi玻璃棉，雌激素抗体W15溶液印迹，藕联甾体激素金标载体蛋白Xi玻璃棉，甾体激素抗体W16溶液印迹，藕联磺胺嘧啶金标载体蛋白Xi玻璃棉，磺胺嘧啶抗体W17溶液印迹，藕联磺胺异恶唑金标载体蛋白Xi玻璃棉，磺胺异恶唑抗体W18溶液印迹，藕联硝基咪唑金标载体蛋白Xi玻璃棉，硝基咪唑抗体W19溶液印迹，藕联硝基呋喃金标载体蛋白Xi玻璃棉，硝基呋喃抗体W20溶液印迹，藕联克球粉金标载体蛋白Xi玻璃棉，克球粉抗体21溶液印迹，藕联黄曲霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，黄曲霉素抗体W22溶液印迹，藕联烟曲霉素金标载体蛋白Xi玻璃棉，烟曲霉素抗体W23溶液印迹。
全文摘要
本发明涉及药物残留检测器具，特别是涉及一种动物体及其产品中药物残留快速检测试纸条I和II，含有支撑层、反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片条，反应试剂载体吸附层粘贴于支撑层上，由样品端依次为纤维层、吸附待检药物相应金标抗体(Wi)或偶联待检药物的金标载体蛋白(Xi)溶液纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，以偶联待检药物的载体蛋白(Xi)溶液及羊或兔抗小鼠IgG抗体(Y)溶液或抗载体蛋白(Xi)抗体溶液分别在纤维素膜上印制检测印迹“|”和对照印迹“|”。本试纸条以棕红色标记显示检测结果，形象、直观、准确，特异性强、敏感性高，不易发生假阳性或假阴性误判，且操作简便、快速，可大大降低劳动强度，缩短检测时间，减少检测成本，易于推广应用。
文档编号G01N33/558GK1403815SQ02115429
公开日2003年3月19日 申请日期2002年1月10日 优先权日2002年1月10日
发明者张改平, 李学伍, 杨艳艳, 邓瑞广, 肖治军, 康晓笛, 郭军庆, 李青梅, 王选年, 王爱萍, 杨继飞, 李灵霞 申请人:河南省农业科学院生物技术研究所
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
