专利名称：一种金防感冒颗粒的快速检测方法
技术领域：
本发明涉及一种金防感冒颗粒的快速检测方法。
背景技术：
金防感冒颗粒(无糖型)为有糖型改变药品规格品种，原规格为每袋15g，一次一袋，一日3次，改变为无糖型之后，每袋5g，一次一袋，一日3次。每天的服用生药量不变，但服用剂量大幅度减�。⑹视糜谔悄虿∪朔�。无糖型的金防感冒颗粒处方组成及制法如下处方山银花233.Ig 防风233. Ig 山楂233. Ig生姜233. Ig 对乙酰氨基酌· 56. Ig制法以上五味药，取山银花、防风、山楂，加8倍量水煎煮二次，每次I.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为I. 05 I. 10 (500C )的清膏,放冷,加乙醇使含醇量达 60%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30 1.35(50°C )的稠膏；生姜切成薄片，加5倍量乙醇浸溃三次，每次24小时，合并浸溃液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为I. 30 I. 35 (500C )的稠膏；取对乙酰氨基酚，以等量递加的方式与甜菊素18g、糊精780g 800g，混合均匀后，加入上述稠膏，搅匀，用乙醇制粒，干燥， 制成1000g，即得。有糖型的金防感冒颗粒处方组成及制法如下处方山银花77.7g 防风77.7g 山楂77. 7g生姜77. 7g 对乙酰氨基酚 18. 7g制法以上五味药，取山银花、防风、山楂，加8倍量水煎煮二次，每次I.5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为I. 05 I. 10 (500C )的清膏,放冷,加乙醇使含醇量达 60%，搅匀，静置24小时，滤过，滤液回收乙醇并浓缩至相对密度为1.30 1.35(50°C )的稠膏；生姜切成薄片，加5倍量乙醇浸溃三次，每次24小时，合并浸溃液，滤过，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度为I. 30 I. 35 (500C )的稠膏；对乙酰氨基酚，加83%乙醇使溶解，加入上述稠膏及蔗糖，搅匀，制成颗粒lOOOg，干燥，即得。原有糖型质量标准收载在国家中成药标准汇编内科肺系(一)，标准号为 WS-11474 (ZD-1474) 2002。处方由金银花、防风、山楂、生姜、对乙酰氨基酚组成。2011年国家药典委员会，对标准进行了转正修订，并于2011年5月在网上公示，转正修订稿中将处方中的金银花修订为山银花；金银花中绿原酸含量测定修订为山银花中绿原酸含量测定，将乙臆-水-憐酸(50 : 400 : 0.2)规范书写为乙臆-水-憐酸(11 : 89 : 0.04),其他均无变化。修订标准号为WS-11474(ZD-1474) 2002-2011Z。原标准收载了防风、绿原酸薄层鉴别以及绿原酸和对乙酰氨基酚的含量测定。两项鉴别需2种供试品溶液，在两块薄层板上，采用两种展开剂，分别展开完成，毒性溶剂用量大，费时长，污染环境；绿原酸和对乙酰氨基酚的含量测定，虽然流动相相同，但检测波长和样品稀释倍数不同，必须要2次高效液相完成。因为在绿原酸的检测波长326nm下，对乙酰氨基酚无吸收(见图I)，而在对乙酰氨基酚的检测波长244nm下，绿原酸的波峰很小(见图2)。本发明的金防感冒颗粒的快速检测方法，是在原有防风与绿原酸薄层鉴别的基础上，将防风脂溶性鉴别成分，根据工艺特性修订为水溶性成分，并首次通过增荧光进行了鉴别；同时增加了对乙酰氨基酚的鉴别；三项鉴别用同一甲醇超声的样品溶液，在两块薄层板上完成。对乙酰氨基酚和防风在一块薄层板上(见图3、4)，绿原酸在另一块薄层板上(见图5)。选择绿原酸和对乙酰氨基酚都有吸收的295nm(见图6、7、8)为检测波长，将原标准中的绿原酸和对乙酰氨基酚各自单一定量测定，合并在一起同时定量测定，并对原流动相进行了重组研究，解决了原色谱柱耐用性不符合要求，部分色谱柱对乙酰氨基酚的波峰包覆杂质峰问题，提高了定量测定的专属性与准确性。
发明内容
本发明针对目前中药的质量检测方法，样品前处理比较繁琐、费时、毒害溶剂用量大，环境污染严重，检测速度无法与机械化大生产相匹配的现状，发明了采用同一甲醇超声的供试品溶液与各对照药材溶液，在2块薄层板上，完成对乙酰氨基酚、防风与绿原酸的薄层鉴别。三项薄层鉴别，只需样品2g，提取溶剂10ml，时间10分钟。并用等度洗脱的方式， 在295nm同时测定了对乙酰氨基酚和绿原酸。使原本二次定量测定完成的测定指标，能够用一次定量测定完成。降低了成本、节约了时间、提高了效率。二成分的定量色谱图，波峰分离良好，对乙酰氨基酚的波峰保留时间7分钟左右，绿原酸的波峰保留时间15分钟左右。根据提取工艺特点，本发明创建了防风水溶性成分增荧光的薄层鉴别方法，拓宽了防风的鉴别范围。依据对乙酰氨基酚和绿原酸的水溶性远大于脂溶性的性质，通过数据对比，将原提取溶剂无水乙醇，修订为70 %的甲醇，使绿原酸的含量提高约30 %，测定数值趋于样品的真实含量(见表I)，有效提高了方法的准确性。通过方法学考察，绿原酸进样量在O. 0926 O. 926 μ g，与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为Y = 2931322. 4X-5113，Y = O. 999999 (见表2、图9);对乙酰氨基酚进样量在O. 9576 9. 576 μ g,与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为Y = 271998. 7Χ+18054, Y = O. 99997(见表3、图10)。采用加样回收实验，结果表明对乙酰氨基酚9次测定的平均回收率为99. 76%，RSD为I. 17% (见表4);绿原酸9次测定的平均回收率为98. 97%， RSD为I. 95% (见表5)。精密度(见表6)、稳定性(见表7)、重复性(见表8)、专属性(见图11、12、13)与柱耐用性(见表9、图14、15、16)实验均符合方法学要求。适用于金防感冒颗粒中对乙酰氨基酚和绿原酸的同时定量测定。本发明解决其技术问题所采用的技术方案为(I)快速薄层鉴别方法①取金防感冒颗粒2 4g，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取对乙酰氨基酚对照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为对照品溶液；再取防风对照药材O. 3g，加甲醇3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取上述三种溶液各4 8 μ I,分别点于同一娃胶GF254薄层板上，以体积比为10 12 : 2 I : 4
2 I 0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；再喷以 10%硫酸乙醇溶液，105°C烘烤I 2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点；②取绿原酸对照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5 μ I和鉴别①项下的供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15 13 5 3 5 3的乙酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出， 热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；(2).绿原酸和对乙酰氨基酚同时定量测定方法A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为5. 5 6. 5 5 4. 5 90 89. 5的乙腈-甲醇-O. I %磷酸为流动相；检测波长为 295nm ;理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000 ；B.对照品溶液制备取绿原酸与对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含绿原酸O. 02mg,对乙酰氨基酹O. 45mg的溶液，即得；C.供试品溶液制备取金防感冒颗粒5g，研细，取0.2 O. 6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇25ml，称定重量，以功率250w、频率50kHz，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；D.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋含山银花以绿原酸C16H18O9计，不得少于10. Omg ;含对乙酰氨基酚C8H9NO2 应为标示量的90. 0% 110. 0%。对于不含蔗糖的金防感冒颗粒优选的测定技术方案为(I)快速薄层鉴别方法①取不含蔗糖的金防感冒颗粒2g，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取对乙酰氨基酚对照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为对照品溶液； 再取防风对照药材O. 3g，加甲醇3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取上述三种溶液各4μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10 : 2 : 4 : I的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液， 105°C烘烤I 2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点；②取绿原酸对照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5 μ I和鉴别①项下的供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15 5 5的乙酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；(2).绿原酸和对乙酰氨基酚同时定量测定方法A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为5. 5 : 4. 5 : 90的乙腈-甲醇-O. I %磷酸为流动相；检测波长为295nm ;理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000 ；
B.对照品溶液制备取绿原酸与对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含绿原酸O. 02mg,对乙酰氨基酹O. 45mg的溶液，即得；C.供试品溶液制备取不含蔗糖的金防感冒颗粒5g，研细，取O. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇25ml，称定重量，以功率250w、频率50kHz，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；D.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋含山银花以绿原酸C16H18O9计，不得少于10. Omg ;含对乙酰氨基酚C8H9NO2 应为标示量的90. 0% 110. 0%。对于含蔗糖的金防感冒颗粒优选的测定技术方案为(I)快速薄层鉴别方法①取含蔗糖的金防感冒颗粒4g，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取对乙酰氨基酚对照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为对照品溶液； 再取防风对照药材O. 3g，加甲醇3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取对照品溶液和对照药材溶液各4 μ I、供试品溶液8 μ 1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12 1.5 4 O. 5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出， 晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，105°C烘烤I 2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点；②取绿原酸对照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5 μ I和鉴别①项下的供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为14 4 4的乙酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；(2).绿原酸和对乙酰氨基酚同时定量测定方法A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为6 : 4. 5 : 89. 5的乙腈-甲醇-O. I %磷酸为流动相；检测波长为295nm ;理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000 ；B.对照品溶液制备取绿原酸与对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含绿原酸O. 02mg,对乙酰氨基酹O. 45mg的溶液，即得；C.供试品溶液制备取含蔗糖的金防感冒颗粒5g，研细，取O. 6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇25ml，称定重量，以功率250w、频率50kHz，超声处理10分钟， 放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；D.测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋含山银花以绿原酸C16H18O9计，不得少于10. Omg ;含对乙酰氨基酚C8H9NO2 应为标示量的90. 0% 110. 0%。本发明的原理如下I.借助甲醇可溶解极性与非极性多种成分的性能，以甲醇为提取溶剂，提取得到全信息量的样品与对照药材溶液。再根据有效成分各自化学结构和极性，在特定的展开条件下，利用其在薄层板上的吸附、解吸附能力不一样，使各有效成分得以分离。这样极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，会呈现出Rf值不同的斑点颜色，而用于同时互不干扰地检测数种成分。2.依据绿原酸和对乙酰氨基酚在紫外区都呈现吸收的性质，为增大低含量的绿原酸峰面积，减小含量高的对乙酰氨基酚峰面积，选择绿原酸与对乙酰氨基酚都有吸收的 295nm作为测定波长，使绿原酸与对乙酰氨基酚的波峰面积大小相当，而且各自的波峰面积，在一定的范围内，又与进样量呈现良好的线性关系，而用于定量测定的。再通过流动相的组分与比例探讨，使绿原酸与对乙酰氨基酚不但波峰分离良好，而且波峰保留时间适宜， 对乙酰氨基酚的波峰保留时间约7分钟，绿原酸的波峰保留时间约15分钟。本发明的创新点及有益效果如下(I)首次采用普通等度洗脱、反相色谱柱，以体积比为5.5 6.5 5 4.5 90 89. 5的乙腈-甲醇-0.1%磷酸为流动相；在295nm处，同时测定了金防感冒颗粒中绿原酸和对乙酰氨基酚含量。使原本2天的工作量，缩短为一天完成，并节约了成倍的流动相与样品处理试剂。(2)依据对乙酰氨基酚和绿原酸的水溶性远大于脂溶性的性质，通过数据对比，以 70%的甲醇取代无水乙醇，解决了原方法不能将绿原酸提取完全，导致测定数值偏离真实含量的问题，使绿原酸的含量提高约30%，提高了方法的准确性。(3)本发明首次采用增荧光的手段，对防风水溶性成分进行了薄层荧光鉴别，不但提供了复方制剂中防风药材水溶性成分的鉴别新方法，而且解决了原薄层鉴别指标与水提取工艺脱节，无法发挥监控的作用。(4)本发明三项薄层鉴别只需样品2g，而且样品、对照药材和对照品前处理，均是甲醇超声即可，简便、快捷，只需甲醇10ml，时间10分钟。与原二项鉴别相比，在增加一项鉴别的情况下，还节约溶剂42ml，时间I. 3小时。同时使薄层鉴别发挥了控制提取工艺作用。(5)本发明方法的问世，不单单为金防感冒颗粒的快速检测提供了方法，而且还为含量悬殊，检测波长各异的不同化合物同时定量测定，提供了研究思路，具表帅与示范作用。
图I同一批金防感冒颗粒326nm检测的HPLC色谱2同一批金防感冒颗粒244nm检测的HPLC色谱3254nm下检视的对乙酰氨基酚斑点图410%硫酸显色后365nm检视的防风突光斑点图5365nm检视的绿原酸突光斑点图6对乙酰氨基酚的光谱扫描7绿原酸的光谱扫描8同一批金防感冒颗粒295nm检测的HPLC色谱9绿原酸的线性关系10对乙酰氨基酚的线性关系11绿原酸和对乙酰氨基酚对照品HPLC色谱图
图12为金防感冒颗粒HPLC色谱13为不含对乙酰氨基酚和山银花的金防感冒颗粒HPLC色谱14耐用性试验-岛津岛津VP-ODS柱(4. 6 X 150mm)的样品HPLC色谱15耐用性试验-迪马dimonsil柱(4. 6X 150mm)的样品HPLC色谱16耐用性试验-GraceSmart RP柱(4. 6 X 250mm)的样品HPLC色谱I、图2、图8、图11、图12、图14、图15、图16中，I为对乙酰氨基酚峰，2为绿原酸峰图3、图4为同一块薄层板，图3是在紫外灯254nm下检视的对乙酰氨基酚斑点， 图4是10%硫酸乙醇溶液显色后，在紫外灯365nm下检视的防风增荧光斑点，图3、图4的样品标号一样，I为防风对照药材，2为防风空白，3、4、5为样品,6为对乙酰氨基酹,7为对乙
酰氨基酚空白图5中，I为绿原酸，2为空白3. 4. 5为样品图9、图10中，纵坐标为峰面积；横坐标为进样量(μ g)
本发明
具体实施例方式实施例I不含蔗糖的金防感冒颗�？焖偌觳夥椒�(I)快速薄层鉴别方法①取不含蔗糖的金防感冒颗粒2g，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取对乙酰氨基酚对照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为对照品溶液； 再取防风对照药材O. 3g，加甲醇3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取上述三种溶液各4μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10 : 2 : 4 : I的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液， 105°C烘烤I 2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点；②取绿原酸对照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5 μ I和鉴别①项下的供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15 5 5的乙酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；(2).绿原酸和对乙酰氨基酚同时定量测定方法A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为5. 5 : 4. 5 : 90的乙腈-甲醇-O. I %磷酸为流动相；检测波长为295nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000 ；B.对照品溶液制备取绿原酸与对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含绿原酸O. 02mg,对乙酰氨基酹O. 45mg的溶液，即得；C.供试品溶液制备取不含蔗糖的金防感冒颗粒5g，研细，取O. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇25ml，称定重量，以功率250w、频率50kHz，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；D.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；
本品每袋含山银花以绿原酸C16H18O9计，不得少于10. Omg ;含对乙酰氨基酚C8H9NO2 应为标示量的90. 0% 110.0%。三批样品的测定结果见表10。实施例2含蔗糖的金防感冒颗�？焖偌觳夥椒�(I)快速薄层鉴别方法①取含蔗糖的金防感冒颗粒4g，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取对乙酰氨基酚对照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为对照品溶液； 再取防风对照药材O. 3g，加甲醇3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取对照品溶液和对照药材溶液各4 μ I、供试品溶液8 μ 1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12 1.5 4 O. 5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出， 晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，105°C烘烤I 2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点；②取绿原酸对照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5 μ I和鉴别①项下的供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为14 4 4的乙酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；(2).绿原酸和对乙酰氨基酚同时定量测定方法A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为 6 4.5 89. 5的乙腈-甲醇-O. I %磷酸为流动相；检测波长为295nm ;理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000 ；B.对照品溶液制备取绿原酸与对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含绿原酸O. 02mg,对乙酰氨基酹O. 45mg的溶液，即得；C.供试品溶液制备取含蔗糖的金防感冒颗粒5g，研细，取O. 6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇25ml，称定重量，以功率250w、频率50kHz，超声处理10分钟， 放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。D.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每袋含山银花以绿原酸C16H18O9计，不得少于10. Omg ;含对乙酰氨基酚C8H9NO2 应为标示量的90. 0% 110.0%。三批样品的测定结果见表10。表I同一批样品不同提取溶剂绿原酸与对乙酰氨基酚含量结果(mg/g)
超声时间(分) 溶剂对乙酰氨基酚含量绿原酸含量
1070% 甲醇58.506Λ
10_无水乙醇_55,05_43_表2绿原酸进样量与峰面积
进样量(Mg) 0.0926 0.23150.4630 0.6945_0.9260_
峰面积_267373 6714821352541 2032038 2709451_
回归方程 Y=2931322.4X-5113，Y =0.999999_
表3对乙酰氨基酚进样量与峰面积
权利要求
1.本发明涉及一种金防感冒颗粒的快速检测方法，其特征在于(1)快速薄层鉴别方法①取金防感冒颗粒2 4g，研细，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取对乙酰氨基酚对照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为对照品溶液；再取防风对照药材O. 3g，加甲醇3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取上述三种溶液各4 8 μ I,分别点于同一娃胶GF254薄层板上，以体积比为10 12 : 2 I: 4 2 : I O. 5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点； 再喷以10%硫酸乙醇溶液，105°C烘烤I 2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点；②取绿原酸对照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5 μ I和鉴别①项下的供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为 15 13 5 3 5 3的乙酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；(2).绿原酸和对乙酰氨基酚同时定量测定方法A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为 5. 5 6. 5 5 4. 5 90 89. 5的乙腈-甲醇-O. I %磷酸为流动相；检测波长为295nm ; 理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000 ；B.对照品溶液制备取绿原酸与对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 Iml含绿原酸O. 02mg，对乙酰氨基酚O. 45mg的溶液，即得；C.供试品溶液制备取金防感冒颗粒5g，研细，取0.2 O.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇25ml，称定重量，以功率250w、频率50kHz，超声处理10分钟，放冷， 再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；D.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得；本品每袋含山银花以绿原酸C16H18OJf，不得少于10. Omg ;含对乙酰氨基酚C8H9NO2应为标示量的90. 0% 110. 0%。
2.根据权利要求I所述的一种金防感冒颗粒的快速检测方法，其特征在于所述的金防感冒颗粒是指含蔗糖的金防感冒颗�：筒缓崽堑慕鸱栏忻翱帕Ａ街�。
3.根据权利要求1-2所述的一种金防感冒颗粒的快速检测方法，其特征还在于(I)快速薄层鉴别方法①取不含蔗糖的金防感冒颗粒2g，研细，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取对乙酰氨基酚对照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为对照品溶液； 再取防风对照药材O. 3g，加甲醇3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取上述三种溶液各4μ1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为10 : 2 : 4 : I的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液， 105°C烘烤I 2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点；②取绿原酸对照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5 μ I和鉴别①项下的供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为 15 : 5 : 5的乙酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯 365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；(2).绿原酸和对乙酰氨基酚同时定量测定方法A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为.5.5 4.5 90的乙腈-甲醇-O. I %磷酸为流动相；检测波长为295nm ;理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000 ；B.对照品溶液制备取绿原酸与对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 Iml含绿原酸O. 02mg，对乙酰氨基酚O. 45mg的溶液，即得；C.供试品溶液制备取不含蔗糖金防感冒颗粒5g，研细，取O.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇25ml，称定重量，以功率250w、频率50kHz，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；D.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得；本品每袋含山银花以绿原酸C16H18OJf，不得少于10. Omg ;含对乙酰氨基酚C8H9NO2应为标示量的90. 0% 110. 0%。
4.根据权利要求1-2所述的一种金防感冒颗粒的快速检测方法，其特征还在于(1)快速薄层鉴别方法①取含蔗糖的金防感冒颗粒4g，研细，加甲醇5ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液；另取对乙酰氨基酚对照品，加甲醇制成每Iml含5mg的溶液，作为对照品溶液； 再取防风对照药材O. 3g，加甲醇3ml，超声处理10分钟，上清液作为对照药材溶液；吸取对照品溶液和对照药材溶液各4μ I、供试品溶液8μ 1，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为12 1.5 4 O. 5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出， 晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；再喷以10%硫酸乙醇溶液，105°C烘烤I 2分钟，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮兰色荧光主斑点；②取绿原酸对照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照品溶液5 μ I和鉴别①项下的供试品溶液2 5 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为 14 4 4的乙酸丁酯-甲酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯 365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；(2).绿原酸和对乙酰氨基酚同时定量测定方法A.色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为 6 4.5 89. 5的乙腈-甲醇-O. I %磷酸为流动相；检测波长为295nm ;理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000 ；B.对照品溶液制备取绿原酸与对乙酰氨基酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 Iml含绿原酸O. 02mg，对乙酰氨基酚O. 45mg的溶液，即得；C.供试品溶液制备取含蔗糖的金防感冒颗粒5g，研细，取O.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加70%甲醇25ml，称定重量，以功率250w、频率50kHz，超声处理10分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得；D.测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得；本品每袋含山银花以绿原酸C16H18OJf，不得少于10. Omg ;含对乙酰氨基酚C8H9NO2应为标示量的90. 0% 110. 0%。
全文摘要
本发明涉及一种金防感冒颗粒的快速检测方法。其特征采用薄层色谱法，以同一供试品溶液，在两块薄层板上，鉴别了对乙酰氨基酚、防风和绿原酸；防风的增荧光鉴别为首次报道；采用普通的等度洗脱，以体积比为5.5～6.5∶5～4.5∶90～89.5的乙腈-甲醇-0.1％磷酸为流动相，在295±1nm处，同时测定了样品中对乙酰氨基酚及绿原酸的含量，使原本二次定量测定完成的测定指标，能够用一次定量测定完成。二成分的定量色谱图，波峰分离良好，对乙酰氨基酚的波峰保留时间约7分钟，绿原酸的波峰保留时间约15分钟。方法简便、快捷、准确、重现，易于普及掌握，有效提高了检测效率，降低了检测成本，减少了环境污染。
文档编号G01N30/90GK102608250SQ201210063430
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月13日 优先权日2012年3月13日
发明者刘勇, 安丽娜, 申玉龙, 韩桂茹 申请人:承德燕峰药业有限责任公司
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