专利名称：贝伐单抗组合疗法用于治疗胰腺癌的血浆生物标志物的制作方法
贝伐单抗组合疗法用于治疗胰腺癌的血浆生物标志物本发明提供通过将贝伐单抗(bevacizumab) ( Avastin )添加至化疗方案,用于
改进患有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者的化疗方案的治疗效果的方法，其通过相对于诊断有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者的对照水平，測定VEGFA、VEGFR2和PLGF中一项或多项的表达水平，特别是血浆表达水平来进行。特别是，本发明提供改进治疗效果的方法，其中治疗效果为患者的总体存活和/或无进展存活。本发明进一歩提供用于评估患者对与化疗方案组合的贝伐单抗(Avastin )的敏感性或响应性的方法，其通过相对于诊断有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者中的对照水平，測定VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平，特别是血浆表达水平来进行。因而，本发明涉及鉴定和选择胰腺癌，特别是转移性胰腺癌中与对与化疗方案，诸如吉西他滨(gemcitabine)-厄洛替尼(erlotinib) (GE)疗法组合的血管发生抑制剂,例如贝伐单抗(Avastin )的敏感性或响应性有关的生物标志物。在这方面，本发明涉及相对于诊断有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者中建立的对照，VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的血浆特异性表达概况用于鉴定对将血管发生抑制剂，例如贝伐单抗(Avastin )添加至标准化疗敏感或响应的患者的用途。本发明进一步涉及通过将血管发生抑制剂，例如贝伐单抗(Avastin )添加至标准化疗，例如吉西他滨-厄洛替尼(GE)疗法，用于改进患有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者的治疗效果，特别是总体存活和/或无进展存活的方法，其通过相对于诊断有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者中的对照，測定VEGFA、VEGFR2和PLGF中一项或多项的血浆特异性表达水平来进行。本发明进ー步提供用于鉴定
依照本发明的方法确定和定义的对血管发生抑制剂，特别是贝伐单抗(Avastin )敏感或响应的患者的试剂盒和组合物。血管发生是癌症形成所必需的，不仅调节原发性肿瘤尺寸和生长，而且影响侵入性和转移性潜力。因而，作为定向抗癌疗法的潜在靶，已经调查了介导血管发生过程的机制。在血管发生调控剂研究的早期，发现血管内皮生长因子(VEGF)信号传导途径优先调节多种癌症类型中的血管发生活性。这种因子经由VEGF受体2 (VEGFR-2)，即介导血管发生的主要VEGF信号传导受体发信号。已经开发了多种治疗剂在多个点调控这种途径。这些疗法包括例如贝伐单抗、舒尼替尼(sunitinib)、索拉非尼(sorafenib)和瓦他拉尼(Vatalanib)0虽然血管发生抑制剂在临床中的使用已经显示出成功，但是并非所有患者都响应或未能完全响应血管发生抑制剂疗法。不知道此类不完全响应背后的机制。因此，越来越需要鉴定对抗血管发生癌症疗法敏感或响应的患者亚组。虽然知道多种血管发生抑制剂，但是最突出的血管发生抑制剂是贝伐单抗(Avastin )。贝伐单抗是ー种特异性结合并阻断VEGF (血管内皮生长因子)的生物学效应的重组人源化单克隆IgGl抗体。VEGF是肿瘤血管发生(肿瘤生长和转移(即肿瘤扩散至身体其它部分)所需要的ー个必要过程)的ー种关键驱动物。Avastin 在欧洲批准用于治疗晚期阶段的四类常见癌症:结肠直肠癌，乳腺癌，非小细胞肺癌(NSCLC)和肾癌，它们每年总共引起超过250万例死亡。在美国，Avastin 是第一种得到FDA批准的抗血管发生疗法，而且它现在批准用于治疗五类肿瘤:结肠直肠癌，非小细胞肺癌，乳腺癌，脑(成胶质细胞瘤)和肾(肾细胞癌)。至今已经用Avastin治疗超过50万患者,而且有超过450项临床试验的一个综合临床程序项目正在调查Avastin在不同情况(例如晩期或早期疾病)中治疗多种癌症类型(包括结肠直肠、乳腺、非小细胞肺、脑、胃、卵巣和前列腺)中的更多用途。重要的是，Avastin 已经显示出作为共同治疗剂有希望，在与广泛的化疗和其它抗癌疗法组合时展现功效。已经发表了 III期研究，证明将贝伐单抗与标准化疗方案组合的有益效果(參见例如 Saltz 等，2008，J.Clin.0ncol.,26:2013-2019 ；Yang 等，2008，Clin.CancerRes.，14:5893-5899 ；Hurwitz 等，2004，N.Engl.J.Med.，350:2335_2342)。然而，正如在血管发生抑制剂的先前研究中，这些III期研究中的一些已经显示了一部分患者对将贝伐单抗(Avastin⑧)添加至他们的化疗方案经历不完全响应。因而，需要确定那些对包括血管发生抑制剂，特别是贝伐单抗(Avastin )的组合疗法响应或有可能响应的患者的方法。如此，本发明下面的技术问题是提供用于鉴定患有或倾向于患上胰腺癌，特别是转移性胰腺癌，可能受益于将血管发生抑制剂，特别是贝伐单抗(Avastin )添加至化疗疗法,例如吉西他滨-厄洛替尼(GE)疗法的患者的方法和手段。该技术问题通过提供权利要求书中表征的实施方案得到解決。因此，本发明提供ー种通过将贝伐单抗添加至所述化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的化疗方案的治疗效果的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的化疗方案的治疗效果的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)患者样品中测定VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA或VEGFR2的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA或VEGFR2的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中测定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA或VEGFR2的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA或VEGFR2的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中测定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA或VEGFR2的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA或VEGFR2的表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA或VEGFR2的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA或VEGFR2的表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA或PLGF的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA或PLGF的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中测定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA或PLGF的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA或PLGF的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中测定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA或PLGF的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA或PLGF的表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，
其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA或PLGF的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA或PLGF的表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明提供ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。 该胰腺癌可以是转移性胰腺癌。因而，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA、VEGFR2和PLGF的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。该胰腺癌可以是转移性胰腺癌。因此，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中測定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA、VEGFR2和PLGF的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中測定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明提供ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。
该胰腺癌可以是转移性胰腺癌。因而，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA、VEGFR2和PLGF的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。该胰腺癌可以是转移性胰腺癌。本发明，因此，涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中測定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA、VEGFR2和PLGF的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中測定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明提供ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA和VEGFR2的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA和VEGFR2的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。因而，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA和VEGFR2的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA和VEGFR2的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。因此，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA和VEGFR2的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA和VEGFR2的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA和VEGFR2的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA和VEGFR2的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明提供ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA和VEGFR2的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA和VEGFR2的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。因而，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA和VEGFR2的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA和VEGFR2的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。因此，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA和VEGFR2的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA和VEGFR2的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA和VEGFR2的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA和VEGFR2的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明提供ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA和PLGF的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的组合对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。因而，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA和PLGF的蛋白质表达水平；并
(c)对VEGFA和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。因此，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA和PLGF的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的组合对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。因而，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的总体存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA和PLGF的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明提供ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA和PLGF的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的组合对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。因而，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA和PLGF的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。因此，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)测定患者样品中VEGFA和PLGF的蛋白质表达水平；并(b)对VEGFA和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的组合对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。因而，本发明涉及ー种通过将贝伐单抗添加至化疗方案，用于改进患有转移性胰腺癌的患者的无进展存活的方法，所述方法包括:(a)自所述患者获得样品；(b)测定VEGFA和PLGF的蛋白质表达水平；并(c)对VEGFA和PLGF的组合表达水平相对于在诊断有转移性胰腺癌的患者中测定的对照组合表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭，其中该化疗方案包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。
本发明提供ー种用于鉴定对将贝伐单抗治疗添加至化疗方案响应或敏感的患者的体外方法，所述方法包括測定来自患者患有、怀疑患有或倾向于患上胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平，由此VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于患有胰腺癌的患者中测定的对照表达水平，特别是转移性胰腺癌升高指示患者对将贝伐单抗添加至所述化疗方案的敏感性。该化疗方案可以包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。因而，本发明涉及ー种用于鉴定对将贝伐单抗治疗添加至化疗方案响应或敏感的患者的体外方法，所述方法包括:(a)自患有、怀疑患有或倾向于患上胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者获得样品；并(b)测定VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；由此VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于患有胰腺癌的患者中測定的对照表达水平，特别是转移性胰腺癌升高指示患者对将贝伐单抗添加至所述化疗方案的敏感性。该化疗方案可以包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。本发明提供ー种用于鉴定对将贝伐单抗治疗添加至化疗方案响应或敏感的患者的体外方法，所述方法包括測定来自患有、怀疑患有或倾向于患上转移性胰腺癌的患者的样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平，由此VEGFA和VEGFR2或VEGFA和PLGF或VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平相对于在患有转移性胰腺癌的患者中測定的对照组合表达水平升高指示患者对将贝伐单抗添加至所述化疗方案的敏感性。该化疗方案可以包含吉西他滨-厄洛替尼疗法。因而，本发明解决所鉴别的技术问题，其在于令人惊讶地显示了相对于在诊断有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者中測定的对照水平，给定患者中VEGFA、VEGFR2和PLGF中一项或多项的血浆特异性表达水平与那些施用与化疗方案组合的血管发生抑制剂的患者中的治疗效果有关的。具体而言，令人惊讶地将VEGFA、VEGFR2和/或PLGF的蛋白质表达水平中的变化鉴定为转移性胰腺癌患者响应将贝伐单抗(Avastin )添加至吉西他滨-厄洛替尼化疗方案的总体存活和/或无进展存活改善的标志物/预测物。对将贝伐单抗(Avastin )添加至化疗方案展现响应或敏感性的患者鉴定为VEGFA、VEGFR2和PLGF中
ー项或多项的蛋白质表达水平相对于自诊断有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者获得的样品中建立的对照表达水平升高。术语“标志物”和“预测物”可互換使用，而且指VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平，如本文中描述的。本发明还涵盖“标志物”和“预测物”的用途，术语“标志物”和“预测物”指VEGFA、VEGFR2和PLGF的血浆表达水平，即本发明还涵盖VEGFA、VEGFR2和PLGF的血浆表达水平中任何两项或更多项的组合的用途。在本发明的语境中，“VEGFA”指血管内皮生长因子蛋白A，以SEQ ID N0:1例示，在图 8 中显示(Swiss Prot 登录号 P15692，Gene ID (NCBI):7422)。术语“VEGFA” 涵盖具有氨基酸序列SEQ ID NO:1的蛋白质及其同源物和同等型。术语“VEGFA”还涵盖VEGFA的已知的同等型，例如剪接同等型，例如VEGF111、VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189和VEGF2tl6，及其变体、同源物和同等型，包括纤溶酶切割VEGF165生成的110个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子，如记载于 Ferrara, Mol.Biol.Cell21:687 (2010) ；Leung 等，Science246:1306(1989);及Houck等Mol.Endocrin.5:1806 (1991)。在本发明的一个具体实施方案中，“VEGFAIgVEGF121和/或VEGF11(I。在本发明的ー个具体实施方案中，“VEGFA”指VEGFm。在本发明的语境中，术语“VEGFA”还涵盖与氨基酸序列SEQ ID NO:1，或与其变体和/或同源物的氨基酸序列，以及该序列的片段具有至少85%、至少90%或至少95%同源性的蛋白质，前提是变体蛋白质(包括同等型)、同源物蛋白质和/或片段受到ー种或多种VEGFA特异性抗体识别，诸如抗体克隆3C5和26503，它们分别可得自Bender RELIATech和R&D Systems，和A4.6.1,如记载于 Kim 等，Growth Factors7 (1):53-64 (1992)。在本发明的语境中，VEGF或VEGF-A的术语“同等型”(isoform)指剪接同等型和通过酶促切割(例如纤溶酶)生成的形式二者。在一个实施方案中，“VEGFA”指未修饰的VEGF。在本发明的语境中，“未修饰”VEGF涉及VEGF、它的同等型和它的切割产物的未修饰氨基酸序列。例如，未修饰的VEGF可以合成生成，或优选在原核表达系统，例如大肠杆菌中重组生成。例如，未修饰的VEGF不携帯翻译后修饰，像糖基化。在本发明的语境中，术语“未修饰VEGF-A”还涵盖其变体和/或同源物，以及VEGF-A的片段，前提是变体蛋白质(包括同等型)、同源物蛋白质和/或片段受到未修饰VEGF-A特异性抗体识别，诸如抗体克隆3C5，它可得自RELIATech GmbH,WolfenoiitteI, Germany。在本发明的语境中，“VEGFR2”指血管内皮生长因子受体2，以SEQ ID NO:2例示，在图 9 中显示(Swiss Prot 登录号 P35968，Gene ID (NCBI):3791)。术语“VEGFR2”涵盖具有氨基酸序列SEQ ID NO:2的蛋白质及其同源物和同等型。在本发明的语境中，术语“VEGFR2”还涵盖与氨基酸序列SEQ ID NO:2，或与其变体和/或同源物的氨基酸序列，以及该序列的片段具有至少85%、至少90%或至少95%同源性的蛋白质，前提是变体蛋白质(包括同等型)、同源物蛋白质和/或片段受到ー种或多种VEGFR2特异性抗体识别，诸如抗体克隆89115 和 89109，它们可得自 R&D Systems。在本发明的语境中，“PLGF”指胎盘生长因子，以SEQ ID NO:3例示，在
图10中显示(Swiss Prot登录号P49763，Gene ID (NCBI):5228)。术语“PLGF”涵盖具有氨基酸序列SEQ ID NO:3的蛋白质及其同源物和同等型。在本发明的语境中，术语“PLGF”还涵盖与氨基酸序列SEQ ID NO:3，或与其变体和/或同源物的氨基酸序列，以及该序列的片段具有至少85%、至少90%或至少95%同源性的蛋白质，前提是变体蛋白质(包括同等型)、同源物蛋白质和/或片段受到ー种或多种PLGF特异性抗体识别，诸如抗体克隆2D6D5和6A11D2，它们可得自 Roche Diagnostics GmbH。因而，本发明涵盖测定蛋白质，包括但不限于如本文中描述的氨基酸序列的表达水平。在此语境中，本发明涵盖检测VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的同源物、变体和同等型；所述同等型或变体可例如包含等位变体或剪接变体。还涵盖检测与如本文中描述的VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项或其片段同源，例如与氨基酸序列SEQ ID NO =USEQID NO:2 或 SEQ ID NO:3 或其片段具有至少 60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 序列同一性的蛋白质。或者/另外，本发明涵盖检测由与编码SEQ ID NO=USEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或其片段、变体或同等型的核酸序列至少60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%相同的核酸序列或其片段编码的蛋白质的表达水平。在此语境中，术语“变体”表示VEGFA、VEGFR2和/或PLGF氨基酸序列或编码所述氨基酸序列的核酸序列因突变，例如删除、添加、替代、插入等而不同于由SEQ ID NO:USEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3鉴别的和/或在上文所述Swiss Prot登录号下可得的独特序列。另外，术语“同源物”指与一种或多种SEQ ID NO:USEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示多肽或其片段具有至少60%、更优选至少80%和最优选至少90%序列同一‘丨生的分子。为了测定ー种氨基酸或核酸序列与如本文中描述的氨基酸或核酸序列是否具有某种程度的同一性，技术人员可使用本领域公知的手段和方法，例如比对，或是手工或是通过使用本领域已知的或本文中描述的计算机程序。依照本发明，术语“相同”或“百分比同一性”在两种或更多种氨基酸或核酸序列的语境中指如使用本领域已知的序列比较算法或通过手工比对和目视检查测量的，在比较窗口上或在指定区域上为最大对应进行比较和比对时，两种或更多种序列或亚序列相同，或规定百分比的氨基酸残基或核苷酸相同(例如与例如SEQ ID NO:USEQ ID NO:2或SEQ IDNO:3氨基酸序列具有60%或65%同一性、优选70-95%同一性、更优选至少95%同一性)。认为具有例如60%至95%或更大序列同一性的序列是基本相同的。此类定义也适用于测试序列的互补物。优选地，所描述的同一性在长度为至少约15至25个氨基酸或核苷酸的区域上、更优选在长度为约50至100个氨基酸或核苷酸的区域上存在。本领域技术人员会知道如何测定序列之间的百分比同一‘丨生，例如使用诸如那些基于CLUSTALW计算机程序(Thompson,Nucl.Acids Res.2 (1994)，4673-4680)或 FASTDB (Brutlag,Comp.App.Biosc1.6 (1990)，237-245)的算法，如本领域已知的。虽然FASTDB算法通常不考虑序列中的内部不匹配删除或添加，即缺ロ，但是在它的计算中，这可以手工修正以避免过高估算％同一性。然而，CLUSTALW在它的同一性计算中确实考虑序列缺ロ。本领域技术人员还可得到BLAST(基本局部算法搜索工具)和BLAST2.0算法(Altschul，1997，Nucl.Acids Res.25:3389-3402 ；Altschul,1993J.Mol.Evol.36:290-300 ；Altschul, 1990, J.Mol.Biol.215:403_410)。作为缺�。糜诤怂嵝蛄械� BLASTN程序使用词长(W) 11、预期(E ) 10、M=5、N=4和双链比较。对于氨基酸序列，作为缺�。珺LASTP程序使用词长(W) 3 和预期(E) 10。BL0SUM62 评分矩阵(Henikoff (1989)PNAS89:10915)使用比对(b) 50、预期(E) 10、M=5、N=4和双链比较。如上文讨论的，BLAST算法生成氨基酸和核苷酸序列二者的比对以測定序列相似性。由于比对的局部性质，BLAST在測定精确匹配中或在鉴定相似序列中尤其有用。BLAST算法输出的基础单元是高评分区段对(HSP)。HSP由任意但相等长度的两个序列片段组成，它们的比对是局部最大的且它们的比对得分达到或超出由使用者设置的阈或截留得分。BLAST办法寻找查询序列和数据库序列之间的HSP以评估找到的任何匹配的统计学显著性，而且只报告那些满足使用者选择的显著性阈的匹配。參数E为报告数据库序列匹配建立统计学显著的阈。E解读为HSP (或ー组HSP)在整个数据库搜索的范围内的机会发生的期望频率的上界。在程序输出中报告其匹配满足E的任何数据库序列。可以用使用BLAST的类似计算机技术来搜索蛋白质或核酸数据库诸如GenBank或EMBL中的相同或相关分子。这种分析比多种基于膜的杂交快得多。另外，可以修改计算机搜索的灵敏度来确定任何特定匹配是否归类为精确或相似。搜索的基础是ー个乘积得分，其定义如下:
权利要求
1.ー种通过将贝伐单抗(bevacizumab)添加至化疗方案,用于改进患有胰腺癌的患者的所述化疗方案的治疗效果的方法，所述方法包括: (a)测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并 (b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。
2.ー种用于鉴定对将贝伐单抗治疗添加至化疗方案响应或敏感的患者的体外方法，所述方法包括测定来自怀疑患有或倾向于患上胰腺癌的患者的样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平，由此VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于患有胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高指示患者对将贝伐单抗添加至所述化疗方案的敏感性。
3.贝伐单抗用于改进患有胰腺癌的患者的化疗方案治疗效果的用途，包括下述步骤: (a)测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平；并 (b)对VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平相对于在诊断有胰腺癌的患者中測定的对照表达水平升高的患者施用与化疗方案组合的贝伐单杭。
4.一种预测怀疑患有、患有或倾向于患上胰腺癌的患者对将贝伐单抗添加至化疗方案的响应或敏感性的体外方法，包括测定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的蛋白质表达水平。
5.特异性探针用于制备用于预测患有、怀疑患有或倾向于患上胰腺癌的患者对将贝伐单抗添加至化疗方案的响应或敏感性的诊断组合物的用途，包括測定患者样品中VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项的表达水平，其中所述探针能够检测VEGFA、VEGFR2和PLGF中ー项或多项。
6.权利要求5的用途，其中该探针为结合分子，像抗体。
7.权利要求1至3任ー项的方法或用途，其中该治疗效果为无进展存活。
8.权利要求1至3任ー项的方法或用途，其中该治疗效果为总体存活。
9.权利要求4至7任ー项的方法或用途，其中測定的蛋白质表达水平为VEGFA或PLGF的。
10.权利要求4至6和8任ー项的方法或用途，其中測定的蛋白质表达水平为VEGFA或VEGFR2 的。
11.权利要求1至8任ー项的方法或用途，其中測定的蛋白质表达水平为VEGFA和VEGFR2的组合表达水平。
12.权利要求1至8任ー项的方法或用途，其中测定的蛋白质表达水平为VEGFA和PLGF的组合表达水平。
13.权利要求1至8任ー项的方法或用途，其中測定的蛋白质表达水平为VEGFA、VEGFR2和PLGF的组合表达水平。
14.权利要求1至13任ー项的方法或用途，其中所述表达水平通过免疫測定法方法来检测。
15.权利要求14的方法或用途，其中所述免疫測定法方法为ELISA。
16.权利要求1至15任ー项的方法或用途，其中所述患者样品为血液样品。
17.权利要求1至16任ー项的方法或用途，其中所述患者样品为血浆样品。
18.权利要求1至17任ー项的方法或用途，其中该胰腺癌为转移性胰腺癌。
19.权利要求18的方法或用途，其中所述化疗方案包含吉西他滨(gemcitabine)和厄洛替尼(erlotinib)。
20.权利要求1至19任ー项的方法或用途，其中所述患者正在用ー种或多种抗癌疗法共同治疗。
21.权利要求20的方法或用途，其中所述抗癌疗法为放射疗法。
22.权利要求1至21任ー项的方法或用途，其中所述样品是在新辅助药物或辅助疗法之前获得的。
23.权利要求1至21任ー项的方法或用途，其中所述样品是在新辅助药物或辅助疗法之后获得的。
24.—种 可用于进行权利要求1至23任ー项的方法的试剂盒，包含能够测定VEGFA、VEGFR2和/或PLGF中ー项或多项的表达水平的多肽。
25.多肽用于在权利要求1至23任ー项中测定VEGFA、VEGFR2和/或PLGF中ー项或多项的表达水平的用途。
26.权利要求24的试剂盒或权利要求25的用途，包含能够测定VEGFA、VEGFR2和/或PLGF中ー项或多项的表达水平的多肽，其中所述多肽适合在免疫測定法方法中使用和/或为对VEGFA、VEGFR2或PLGF特异性的抗体。
全文摘要
本发明提供通过将贝伐单抗(bevacizumab)添加至化疗方案，用于改进患有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者的化疗方案的治疗效果的方法，其通过相对于诊断有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者的对照水平，测定VEGFA、VEGFR2和PLGF中一项或多项的表达水平，特别是血浆表达水平来进行。特别是，本发明提供改进治疗效果的方法，其中治疗效果为患者的总体存活和/或无进展存活。本发明进一步提供用于评估患者对与化疗方案组合的贝伐单抗的敏感性或响应性的方法，其通过相对于诊断有胰腺癌，特别是转移性胰腺癌的患者中的对照水平，测定VEGFA、VEGFR2和PLGF中一项或多项的表达水平，特别是血浆表达水平来进行。
文档编号G01N33/574GK103140761SQ201180044879
公开日2013年6月5日 申请日期2011年7月18日 优先权日2010年7月19日
发明者P.德尔马, D.福尔恩兹勒, F.克劳斯, S.谢勒 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司
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