专利名称：一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条及试剂盒的制作方法
技术领域：
，本实用新型属于生物检测领域，涉及一种检测耗材，具体涉及一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条及试剂盒。
背景技术：
卵清蛋白，英文名ovalbumin,蛋清中的主要糖蛋白(45kDa)。其一级结构和立体结构均与血清中的丝氨酸蛋白酶抑制剂家族的成员同源。鸡卵清蛋白由385个氨基酸残基 组成，仅有一条杂合型糖链。鸡蛋过敏原卵清蛋白第最常见的八大食品过敏原之一。过敏疾病严重�：θ嗣堑纳硖褰】担⒘康墓粼涂梢允咕蟛糠止艋颊卟糁⒆础Ｎ吮苊饨哟ノ⒘康墓粼粼募觳獬晌蔽裰�。对过敏原的检测，体内试验方法可提供直接的证据，但由于安全因素等方面考虑，只有在不得已情况下在医院进行，而且费用昂贵，风险大；与此相比体外实验方法具有方便、安全的优点，但却存在着准确性差的缺点。目前体外检测方法有免疫法、PCR法、组胺释放试验法、过敏原指纹快速检测法等。虽然目前有关过敏原检测的刚发很多，但都存在各自不同的问题，如检测速度慢、成本高、需特定的分析仪器等，这些制约了食品中过敏原检测方法的发展。而酶联免疫吸附分析法虽然快速准确，但使用复杂、成本高、灵敏度不高，并且要求专业技术人员来操作，这些缺陷使其推广使用受到限制。申请号为201010209055. 5的发明专利，公开了一种食品中鸡蛋过敏原卵清蛋白的酶联免疫检测方法，该方法检测鸡蛋过敏原卵清蛋白前、后都需要做必要的仪器清洗及保养工作，并且要求专业技术人员来操作。免疫胶体金技术(Immunogold labelling techique)是上世纪80年代继突光素、放射性同位素和酶三大标记技术后发展起来的固相标记免疫测定技术。该技术主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，形成肉眼可见的红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。快速诊断试纸条是20世纪90年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新型层析材料基础上发展起来的一项新型体外诊断技术，近年来发展迅速，在生物医学领域特别是医学检验中得到了广泛应用。该技术主要是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在硝酸纤维膜上，胶体金标记试剂吸附在结合垫上，当待测样品加到试纸条一端的样品垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体区域时，待测物金标试剂复合物与之发生特异性结合而被截留，胶体金标记聚集在检测带上，可通过目测得到直观的显色结果。而游离的标记物则越过检测带，从而达到与检测物自动分离的目的。竞争抑制法可用于测定抗原或抗体，以测定抗原为例，其原理为标本中的受检抗原和固相的包被抗原竞争与标记抗体结合，当标本中的受检抗原的量大于等于试剂的阈值，标记抗体则不会与固相的包被抗原结合；若标本中无受检抗原，则标记抗体直接与固相的包被抗原结合。[0008]目前，将免疫竞争抑制法与胶体金检测技术相结合来对鸡蛋过敏原卵清蛋白进行快速检测，且具有高效、灵敏、特异、便捷，经济等特点的胶体金试纸条鲜有报道。
实用新型内容为解决上述领域的需求和空白，本实用新型旨在提供一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条及试剂盒，本实用新型试纸条采用竞争抑制法和免疫胶体金技术相结合快速检测食品中的鸡蛋过敏原卵清蛋白；本实用新型试纸条操作简单，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，容易普及到食品企业及家庭，以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，并且具有快速、简便、灵敏、准确、特异、经济的特点。一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条，在高度方向上包括基板支撑层、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层上；所述反应试剂载体吸附层从沾液端到手持端依次设有样品纤维垫，金标纤维垫，纤维素药膜，手持端吸水材料垫；在所述样品纤维垫、金标纤维垫和手持端吸水材料垫上覆盖有保护膜层，所述纤维素药膜垫上从手持端到沾液端依次设有对照线C线、检测线T线，所述对照线C线和检测线T线相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直，其特征在于，所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体；所述对照线C线包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述检测线T线包被有鸡蛋过敏原卵清蛋白抗原。所述鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体为鸡蛋过敏原卵清蛋白单抗。所述胶体金试纸条，其特征在于，在样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T线平行的可视的MAX标志线。所述手持端吸水材料垫的材料是粗纤维吸水纸，所述金标纤维垫的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。所述保护膜层为胶带。所述基板支撑层为不吸水的塑料基板。还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的试剂盒，其特征在于包括上述任一胶体金试纸条和样品稀释用具。技术效果根据胶体金检测的原理，将本实用新型的胶体金试纸条的粘液端浸入待测液中，或者在粘液端的样品纤维层滴加待测液，待测液通过虹吸带动待检鸡蛋过敏原卵清蛋白及金标纤维垫中的胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体一起向硝酸纤维素膜方向扩散，并最终渗入手柄端吸水纸中，扩散过程中待检鸡蛋过敏原卵清蛋白可与胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体相结合,进而封闭胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体上鸡蛋过敏原卵清蛋白结合点，阻止胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体与纤维素药膜上偶联鸡蛋过敏原卵清蛋白的载体蛋白的检测线T线相结合，检测线不能显色，而兔抗小鼠IgG多抗则可与胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体相结合，对照线C线显红色，则为阳性，反之，待测液中无鸡蛋过敏原卵清蛋白则不能阻止胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体与纤维素药膜上偶联鸡蛋过敏原卵清蛋白的载体蛋白的检测线T线相结合，检测线T线显红色，同样，兔抗小鼠IgG多抗也与胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体相结合，对照线C线显红色，形成两条红色印记为阴性，如果纤维素药膜上没有显示红色标记，则表明试纸条生效。本实用新型的胶体金试纸条不同于现有的试纸条之处在于所述纤维素药膜垫上从手持端到沾液端依次设有对照线C线、检测线T线，所述对照线C线和检测线T线相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直，其特征在于，所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体；所述对照线C线包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述检测线T线包被有鸡蛋过敏原卵清蛋白抗原。本实用新型试纸条采用竞争抑制法原理以及胶体金技术快速检测水产品中鸡蛋过敏原卵清蛋白。本实用新型试纸条通过选定金标纤维垫、T线、C线和样品纤维垫上的相应的生物包被试剂来实现对鸡蛋过敏原卵清蛋白的快速检测，同时本实用新型试纸条兼顾检测的灵敏度和特异性。本实用新型,优选地,所述鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体为鸡蛋过敏原卵清蛋白单抗，与待测鸡蛋过敏源卵清蛋白或检测线上的鸡蛋过敏源卵清蛋白抗原进行特异性反应。·本实用新型，优选在样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T线平行的可视的MAX标志线。用于提醒操作人员，操作时待测液不要超过标志线，以免引起假阳性。本实用新型，优选所述样品纤维垫的材料是玻璃纤维棉，所述手持端吸水材料垫的材料是粗纤维吸水纸，所述纤维素药膜的材料是硝酸纤维素膜，所述金标纤维垫的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。这些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保证本实用新型检测试纸条的检测速度和准确性。本实用新型，优选保护膜层为胶带，使试纸条免受污染，成本低且效果好。本实用新型，优选基板支撑层为不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撑材料吸收待测液从而影响水平方向的迁移。本实用新型，优选还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。便于携带和保存。本实用新型试纸条采用竞争抑制法原理以及胶体金技术快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白，用于食品中的鸡蛋过敏原卵清蛋白的快速检测；本实用新型试纸条操作简单，拿来即用，方便快捷，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，并且保证检测的灵敏性、准确性和高效率。
图I本实用新型试纸条的俯视图其中1-手持端，2-对照线C线，3-检测线T线，4MAX标志线，5_沾液端，6_纤维素药膜，7-样品纤维垫，8-手持端吸水材料垫，9-金标纤维垫，13-胶带边缘线。图2本实用新型试纸条的纵向剖面图其中6_纤维素药膜,7_样品纤维垫,8_手持端吸水材料垫,9_金标纤维垫，10-手持端胶带，11-箭头胶带，12-基板支撑层。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本实用新型，并不局限于所述最佳实施方式，不对本实用新型的内容和保护范围构成限制，任何人在本实用新型的启示下或是将本实用新型与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本实用新型相同或相近似的产品，均落在本实用新型的保护范围之内。本实用新型旨在提供一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条，本实用新型试纸条采用双竞争抑制法原理以及胶体金技术快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白，用于食品中的鸡蛋过敏原卵清蛋白的快速检测；本实用新型试纸条操作简单，使用方便，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，容易普及到食品企业及单个家庭，以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，并且具 有快速、简便、灵敏、准确、特异的特点。根据胶体金检测的原理，将本实用新型的胶体金试纸条的粘液端浸入待测液中，或者在粘液端的样品纤维层滴加待测液，待测液通过虹吸带动待检鸡蛋过敏原卵清蛋白及金标纤维垫中的胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体一起向硝酸纤维素膜方向扩散，并最终渗入手柄端吸水纸中，扩散过程中待检鸡蛋过敏原卵清蛋白可与胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体相结合,进而封闭胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体上鸡蛋过敏原卵清蛋白结合点，阻止胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体与纤维素药膜上偶联鸡蛋过敏原卵清蛋白的载体蛋白的检测线T线相结合，检测线不能显色，而兔抗小鼠IgG多抗则可与胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体相结合，对照线C线显红色，则为阳性，反之，待测液中无鸡蛋过敏原卵清蛋白则不能阻止胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体与纤维素药膜上偶联鸡蛋过敏原卵清蛋白的载体蛋白的检测线T线相结合，检测线T线显红色，同样，兔抗小鼠IgG多抗也与胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体相结合，对照线C线显红色，形成两条红色印记为阴性，如果纤维素药膜上没有显示红色标记，则表明试纸条生效。本实用新型,优选地,所述鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体为鸡蛋过敏原卵清蛋白单抗，与待测鸡蛋过敏源卵清蛋白或检测线上的鸡蛋过敏源卵清蛋白抗原进行特异性反应。本实用新型试纸条，在高度方向上包括基板支撑层12、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层12上；所述反应试剂载体吸附层从沾液端5到手持端I依次设有样品纤维垫7，金标纤维垫9，纤维素药膜6，手持端吸水材料垫8 ;在所述样品纤维垫7、金标纤维垫9和手持端吸水材料垫8上覆盖有保护膜层。本实用新型的胶体金试纸条不同于现有的试纸条之处在于所述纤维素药膜6上从手持端I到沾液端5依次设有对照线C线2、检测线T线3，所述对照线C线2和检测线T线3相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直，其特征在于，所述金标纤维垫9上包被有胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体；所述对照线C线2包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述检测线T线3包被有鸡蛋过敏原卵清蛋白半抗原。本实用新型，优选在样品纤维垫7上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T线3平行的可视的MAX标志线4。用于提醒操作人员，操作时待测液不要超过标志线4，以免引起假阳性。[0042]本实用新型，优选所述样品纤维垫7的材料是玻璃纤维棉，所述手持端吸水材料垫8的材料是粗纤维吸水纸，所述纤维素药膜6的材料是硝酸纤维素膜，所述金标纤维垫9的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。这些材料配合使用，其吸水性及毛吸作用配合良好，保证本实用新型检测试纸条在检测速度和准确性。本实用新型，优选保护膜层为胶带，使试纸条免受污染，成本低且效果好。本实用新型，优选基板支撑层12为不吸水的塑料基板，不吸水的材料，避免支撑材料吸收待测液从而影响水平方向的迁移。本实用新型，优选还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。便于携带和保存。实验例I.本实用新型试纸条的制备方法 试纸条的制备程序如下步骤I.纤维素药膜的包被I、将兔抗小鼠IgG多抗作为对照线C线，鸡蛋过敏原卵清蛋白抗原作为检测线T线，两个试剂分别按照所需的浓度(范围1.5-2mg/ml)，用20mM的PBS进行稀释。2、将配制好的上述试剂，按照C、T线位置分别包被到硝酸纤维素膜上，然后干燥6小时，温度为30°C，湿度< 35%，从而制得纤维素药膜。步骤2.金标纤维层的标记I、取40nm的胶体金溶液，按终浓度8-12 μ I/ml加入O. 2M K2CO3,加入一定浓度的鸡蛋过敏原卵清蛋白单抗，放置室温反应15-30分钟，然后按照浓度20 μ Ι/ml加入20%BSA的溶液，用于饱和游离的胶体金。最后lOOOOrpm，离心30分钟，去除上清液中未结合的蛋白质。用等体积的O. 5m硼酸溶液(含l%Tween、5%蔗糖、1%水解BSA、1%水解酪蛋白、O. 1%PVA)复溶沉淀的胶体金标记原液。2、将上述胶体金标记原液按照10-20%浓度，用O. 5m硼酸溶液进行稀释，从而配制成标记后的胶体金工作液。然后再将该工作液铺于30*30cm玻璃纤维垫上,干燥6小时,温度为30°C，湿度彡35%，从而制得金标垫。步骤3.试纸条的组装I、将塑料板平放在操作台上，贴上双面胶带。2、撕掉双面胶带衬纸，在距塑料板上端30mm处贴上已包被有鸡蛋过敏原卵清蛋白抗原和兔抗小鼠IgG多克隆抗体的硝酸纤维素膜。3、将粗纤维吸水纸压硝酸纤维素膜上端2mm贴上，上端与塑料板上端取齐。4、将小无纺布压硝酸纤维素膜下端O. 5mm处贴上。5、将金标垫取齐压于小无纺布上面。6、将玻璃纤维垫压于金标垫上约一半，下端距塑料板下端2mm处贴上。7、将大无纺布与金标垫上端取齐，下端与塑料板下端取齐贴上。8、将箭头胶带压硝酸纤维素膜I. 5-2mm贴上。9、将手持端胶带压粗纤维吸水纸贴上。检测阳性样本时候，本实用新型产品则是样本中的鸡蛋过敏原卵清蛋白先与胶体金标记鸡蛋过敏原卵清蛋白单抗进行特异性结合，进而阻止胶体金标记鸡蛋过敏原卵清蛋白单抗与药膜包被的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗原进行特异性结合反应。而对照试剂则是胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白单抗在药膜处与兔抗小鼠IgG多抗进行特异性结合反应。本实用新型一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条采用竞争抑制法原理和免疫胶体金技术相结合快速检测食品中的鸡蛋过敏原卵清蛋白。本实用 新型试纸条操作简单，使用方便，拿来即用，不需要本领域的专业人员，能够满足不同层次人员的需要，容易普及到食品企业及单个家庭，本实用新型以符号显示结果，摆脱了对设备、仪器、人员及贮存和运输环境的特殊要求，并且具有快速、简便、灵敏、准确、特异的特点。
权利要求1.一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条，其特征在于，在高度方向上包括基板支撑层、反应试剂载体吸附层，所述反应试剂载体吸附层固定在所述基板支撑层上； 所述反应试剂载体吸附层从沾液端到手持端依次设有样品纤维垫，金标纤维垫，纤维素药膜，手持端吸水材料垫； 在所述样品纤维垫、金标纤维垫和手持端吸水材料垫上覆盖有保护膜层，所述纤维素药膜垫上从手持端到沾液端依次设有对照线C线、检测线T线，所述对照线C线和检测线T线相互平行且与所述胶体金试纸条长度方向相垂直，所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体；所述对照线C线包被有兔抗小鼠IgG多抗，所述检测线T线包被有鸡蛋过敏原卵清蛋白抗原。
2.根据权利要求I所述快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条，其特征在于，所述鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体为鸡蛋过敏原卵清蛋白单抗。
3.根据权利要求I所述快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条，其特征在于，在样品纤维垫上对应的保护膜层上表面标有与所述检测线T线平行的可视的MAX标志线。
4.根据权利要求I所述快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条，其特征在于，所述样品纤维垫的材料是玻璃纤维棉，所述手持端吸水材料垫的材料是粗纤维吸水纸，所述金标纤维垫的材料是吸附金标蛋白的玻璃纤维棉。
5.根据权利要求I所述快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条，其特征在于，所述保护膜层为胶带。
6.根据权利要求I所述快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条，其特征在于，所述基板支撑层为不吸水的塑料基板。
7.根据权利要求1-6任一所述快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条，其特征在于，还包括外壳，所述外壳具有中空位，所述中空位与所述反应试剂载体吸附层及所述基板支撑层形成的简易胶体金试纸条的形状大小相匹配，用于装载所述反应试剂载体吸附层，所述外壳上表面对应于样品纤维垫及纤维素药膜的位置分别设有加样窗和视窗。
8.一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的试剂盒，其特征在于包括权利要求1-6任一所述胶体金试纸条和样品稀释用具。
9.一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的试剂盒，其特征在于包括权利要求7所述胶体金试纸条和样品稀释用具。
专利摘要本实用新型一种快速检测鸡蛋过敏原卵清蛋白的胶体金试纸条及试剂盒，属检测耗材，其特征在于，所述金标纤维垫上包被有胶体金标记的鸡蛋过敏原卵清蛋白抗体；所述对照线C线包被有兔抗鼠IgG多抗，所述检测线T线包被有鸡蛋过敏原卵清蛋白半抗原，本实用新型试纸条采用竞争抑制法原理以及胶体金技术快速检测食品中的鸡蛋过敏原卵清蛋白，本实用新型试纸条简捷、灵敏、特异、准确。
文档编号G01N33/558GK202710568SQ20122029091
公开日2013年1月30日 申请日期2012年6月15日 优先权日2012年6月15日
发明者张春山, 张永胜 申请人:北京中检葆泰生物技术有限公司
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
