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专利名称：一种细胞复活剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及组织芯片制备领域，特别涉及到一种用于使病理组织蜡块软化和生物芯片细胞活性转升的细胞复活剂及其制备方法和应用。
背景技术：
在临床病理诊断过程中，通常需要存档案，把制备好的蜡块保存起来，但是，由于通常用于处理标本的液体为醛类、醇类及丙酮等，均有使组织变硬、变脆的副作用，加之受气温、湿度、风蚀等气候条件的影响，随着时间的延长，组织干枯，变脆，变硬，更不能用来制作组织芯片。在组织芯片制作过程中，也经常会遇到因为放置过久或保存不当，或由于通常用于处理标本的液体为醛类、醇类及丙酮等，均有使组织变硬、变脆的副作用，加之受气温、湿度、风蚀等气候条件的影响，保存时间愈久，其副作用愈突出，尤其是子宫肌肉瘤，皮 肤等含纤维成份丰富的组织，极易失去原有的柔韧度。对这些陈旧的正常或病理的标本不能进行形态学观察和特定基因以及表达蛋白质等不同分子水平上的研究，尤其是严重影响了回顾性的调查，涉及到医学，生物学，及动植物学。因此，现有技术还有待于改进和发展。

发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种细胞复活剂及其制备方法和应用，旨在解决蜡块组织变硬、变脆或发糟，存在着难以制作组织芯片的问题。本发明的技术方案如下
一种细胞复活剂，其中，按体积百分比组成为
异丙醇32-38% ；
一缩二甘油32-37% ；
丙三醇7-11%;
水杨酸-羟基苯甲酸7-11% ；
乙酸7-11%;
苯酚1-3% ；
d-芋烯O. 25-0. 45% ；
Y-松油烯O. 18-0. 38% ；
癸醛O. 07-0. 27% ；
辛醛O. 18-0. 38% ；
芳樟醇O. 25-0. 45% ；
柠檬醛O. 31-0. 51% ；
羊毛脂3. 07-4. 07%。
所述的细胞复活剂，其中，所述异丙醇为质量浓度为87%的异丙醇；所述羊毛脂为浓度30%的羊毛脂。所述的细胞复活剂，其中，按体积百分比组成为
87% 异丙醇34. 57% ；
一缩二甘油33. 87% ；
丙三醇8. 64% ；
水杨酸8. 64% ；
乙酸8. 64% ； 苯酚I. 73% ；
d-芋烯O. 35% ；
Y-松油烯O. 28% ；
癸醛O. 17% ；
辛醛O. 28% ；
芳樟醇O. 35% ；
柠檬醛O. 41% ；
羊毛脂2.07%。一种如上所述的细胞复活剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤
根据上述配方，依次把各种液体放进容量瓶内，把电磁棒放进液体中，在电磁炉上搅拌，直到全部混合均匀。一种如上所述的细胞复活剂的应用，其特征在于，将所述细胞复活剂用于复原组织蜡块和生物芯片细胞。所述的细胞复活剂的应用，其中，具体包括以下步骤
将需要复原的组织蜡块用细胞复活剂在37°c下浸润2小时。所述的细胞复活剂的应用，其中，还包括以下步骤
所述经过复原的组织蜡块在一 20摄氏度条件下冷冻约2小时。有益效果本发明的细胞复活剂，可以把由于福尔马林固定后形成的三维胶联结构打开，而且，使组织变软，组织细胞复活，容易进行切片，可以供医学和生物学研究正常使用。可用于病理组织蜡块的软化和生物芯片细胞的反胶联、活性转升，具有不损害组织结构和染色效果，并使处理过的标本或芯片达到新鲜蜡块组织柔软程度的优点。
具体实施例方式为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。本发明提供的细胞复活剂，是一种既不损害组织结构和染色效果，又能达到新鲜蜡块组织柔软程度的、能使组织细胞活性转升的细胞复活剂。所述细胞复活剂是一种反胶联软化组织，能使细胞复活的化学配方，可以用来抢救珍贵病理组织，可以把因福尔马林固定后形成的三维胶联结构打开，而且，使组织变软，组织细胞复活，容易切片，可以供医学和生物学研究正常使用。具体地，所述细胞复活剂，按照体积百分比计，由以下成分组成异丙醇32-38% ；
一缩二甘油32-37% ；
丙三醇7-11%;
水杨酸-羟基苯甲酸7-11% ；
乙酸7-11%;
苯酚1-3% ；
d-芋烯(d-limonene)O. 25-0. 45% ；
Y-松油烯(Terpinene)O. 18-0. 38% ；
癸醛(Decanal)O. 07-0. 27% ；
辛醛(Octanal)O. 18-0. 38% ；
芳棒醇(Linalool)O. 25-0. 45% ；
柠檬醛O. 31-0. 51% ；
羊毛脂3. 07-4. 07%。其中，所述异丙醇的分子式为C3H8O,分子量为60. 07。在所述组织细胞复合剂中，所述异丙醇优选为采用质量浓度为87%的异丙醇。所述一缩二甘油为高纯的一缩二甘油。所述丙三醇，即甘油,其化学式为C3H8O3，分子量为92. 09。所述水杨酸-轻基苯甲酸(2-Hydroxybenzoicacid;Keralyt; Occlusal;Verrugon),其分子式为C7H603，结构式为C6H4 (OH) (COOH)，分子量为138. 12，CAS号为69-72-7，EINECS [I]，比重为 I. 443，熔点为 156。。 159。。。所述乙酸，即冰醋酸，分子式为C2H4O2 (常简写为HAc)或CH3COOH,其分子量60· 0，CAS 登录号64-19-7, EINECS 登录号200-580_7。
所述苯酚化学式为C6H5OH,又名石炭酸、羟基苯，分子量94. 11，EINECS登录号203-632-7。所述柠檬醛(英文=Citral )，即“3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛”，化学式C1qH160。所述羊毛脂为浓度30%的羊毛脂，是指原料存在的浓度为30%的羊毛脂。本发明中还提供所述细胞复活剂的制备方法，具体包括以下步骤
根据上述配方，依次把各种液体放进容量瓶内，把电磁棒放进液体中，在电磁炉上搅拌，直到全部混合均匀。其中，所述搅拌过程的时间一般为2小时左右。所述溶液经过搅拌一段时间后，用肉眼确认液体全部混合均匀，即可得到所述细胞复活剂。本发明中还提供所述细胞复活剂的应用，将所述细胞复活剂用于复原组织蜡块和生物芯片细胞，可实现组织蜡块的软化和生物芯片细胞的反胶联、活性转升，其具体包括以下步骤
将需要复原的组织蜡块用细胞复活剂在37°C下浸润2小时左右。在所述经过复原软化的组织蜡块，在一 20摄氏度条件下冷冻约2小时，切片，染色，用显微镜观察组织结构。所述细胞复活剂能松解组织细胞的纤维组织，且溶解脂肪，使细胞间孔隙疏松，随之各种软化试剂更易渗透，而甘油的浸润使蜡块组织软化更完全，更柔韧。本发明根据各种试剂的特性，合理配方、扬长避短，通过调整处理时间及适当控制温度，是可以做出高质量的切片的。同样，对新鲜标本由于处理不好造成的蜡块组织皱缩、凹陷、变硬等情况，采用本发明所述的细胞复活剂也能使蜡块组织回复柔软。所述细胞复活剂，按照体积百分比计，最佳由以下成分组成
87% 异丙醇34. 57% ；
一缩二甘油33. 87% ；
丙三醇8. 64% ；
水杨酸8. 64% ；
乙酸8. 64% ；
苯酚I. 73% ；
d-芋烯O. 35% ；
Y-松油烯O. 28% ；
癸醛O. 17% ；
辛醛O. 28% ；
芳樟醇O. 35% ；
柠檬醛O. 41% ；
羊毛脂(30%)2.07%。经过多次试验和发明人的研究调配发现，采用上述组分制成的细胞复活剂处理组织细胞，能达到最好的使细胞复活的效果。以下通过具体的实施例对本发明作进一步详细说明
实施例I
取87%异丙醇1000ml，一缩二甘油980ml，丙三醇250ml，水杨酸250 ml，乙酸250 ml,苯酹50 ml, d-芋烯10 ml, Y-松油烯8 ml,癸醒5 ml,辛醒8 ml,芳樟醇10 ml,朽1檬醒12 ml，羊毛脂(30%)60 ml，按所取先后顺序将各组分加入到容量瓶中，把电磁棒放进液体中，在电磁炉上搅拌2小时，直到全部溶解后即可得到本产品。取60块15年以上存档的组织蜡块，包括脾脏、皮肤黑色素瘤和含血丰富的急性胆囊炎组织蜡块，使用实施例I所述的细胞复活剂在37°C条件下浸润2小时，而后对软化处理过的蜡块样品在_20°C条件下冷冻2小时，对样品进行切片，HE染色，显微镜下观察处理后组织结构。处理后组织切片完整，组织化学和原位杂交试验结果与新鲜组织相同。取200个12年以上陈旧的组织蜡块，包括纤维成分含量高的子宫肌瘤，子宫劲和皮肤等组织，使用实施例I所述的细胞复活剂在37°C条件下浸润2小时，而后对软化处理过的蜡块样品在_20°C条件下冷冻2小时，对样品进行切片，HE染色，显微镜下观察处理后组织结构，处理后的切片组织结构完整，染色鲜艳清晰。实施例2
取87%异丙醇640ml，一缩二甘油701. 8ml，丙三醇130ml，水杨酸-羟基苯甲酸220ml，乙酸130ml,苯酌· 60ml, d-芋烯5ml, Y -松油烯7. 6ml,癸醒I. 4 ml,辛醒7. 6 ml,芳樟醇9ml，柠檬醛6.2 ml,羊毛脂(30% ) 81. 4ml，按所取先后顺序将各组分加入到容量瓶中，把电磁棒放进液体中，在电磁炉上搅拌2小时，直到全部溶解后即可得到本产品。取20块10年以上存档的组织蜡块，包括脾脏、皮肤黑色素瘤和含血丰富的急性胆囊炎组织蜡块，使用实施例2所述的细胞复活剂在37°C条件下浸润2小时，而后对软化处理过的蜡块样品在_20°C条件下冷冻2小时，对样品进行切片，HE染色，显微镜下观察处理后组织结构。处理后组织切片完整，组织化学和原位杂交试验结果与新鲜组织相同。取30个10年以上陈旧的组织蜡块，包括纤维成分含量高的子宫肌瘤，子宫劲和皮肤等组织，使用实施例2所述的细胞复活剂在37°C条件下浸润2小时，而后对软化处理过的蜡块样品在_20°C条件下冷冻2小时，对样品进行切片，HE染色，显微镜下观察处理后组织结构，处理后的切片组织结构完整，染色鲜艳清晰。实施例3
取87%异丙醇721. 8ml，一缩二甘油620ml，丙三醇210ml，水杨酸-羟基苯甲酸120ml，乙酸210 ml,苯酌· 20ml, d-芋烯9 ml, Y -松油烯3. 6 ml,癸醒5. 4 ml,辛醒3. 6 ml,芳樟醇5 ml，柠檬醛10.2 ml，羊毛脂(30%) 61. 4 ml，按所取先后顺序将各组分加入到容量瓶 中,把电磁棒放进液体中,在电磁炉上搅拌2小时，直到全部溶解后即可得到本产品。取20块10年以上存档的组织蜡块，包括脾脏、皮肤黑色素瘤和含血丰富的急性胆囊炎组织蜡块，使用实施例3所述的细胞复活剂在37°C条件下浸润2小时，而后对软化处理过的蜡块样品在_20°C条件下冷冻2小时，对样品进行切片，HE染色，显微镜下观察处理后组织结构。处理后组织切片完整，组织化学和原位杂交试验结果与新鲜组织相同。取30个10年以上陈旧的组织蜡块，包括纤维成分含量高的子宫肌瘤，子宫劲和皮肤等组织，使用实施例4所述的细胞复活剂在37°C条件下浸润2小时，而后对软化处理过的蜡块样品在_20°C条件下冷冻2小时，对样品进行切片，HE染色，显微镜下观察处理后组织结构，处理后的切片组织结构完整，染色鲜艳清晰。应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
权利要求
1.一种细胞复活剂，其特征在于，按体积百分比组成为 异丙醇32-38% ； 一缩二甘油32-37% ； 丙三醇7-11%; 水杨酸-羟基苯甲酸7-11% ； 乙酸7-11%; 苯酚1-3% ； d-芋烯O. 25-0. 45% ； Y-松油烯O. 18-0. 38% ； 癸醛O. 07-0. 27% ； 辛醛O. 18-0. 38% ； 芳樟醇O. 25-0. 45% ； 柠檬醛O. 31-0. 51% ； 羊毛脂3. 07-4. 07%。
2.根据权利要求I所述的细胞复活剂，其特征在于，所述异丙醇为质量浓度为87%的异丙醇；所述羊毛脂为浓度为30%的羊毛脂。
3.根据权利要求2所述的细胞复活剂，其特征在于，按体积百分比组成为 87% 异丙醇34. 57% ； 一缩二甘油33. 87% ； 丙三醇8. 64% ； 水杨酸8. 64% ； 乙酸8. 64% ； 苯酚I. 73% ； d-芋烯O. 35% ； Y-松油烯O. 28% ； 癸醛O. 17% ； 辛醛O. 28% ； 芳樟醇O. 35% ； 柠檬醛O. 41% ； 羊毛脂2.07%。
4.一种如权利要求1-3任一项所述的细胞复活剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 根据上述配方，依次把各种液体放进容量瓶内，把电磁棒放进液体中，在电磁炉上搅拌，直到全部混合均匀。
5.一种如权利要求1-3任一项所述的细胞复活剂的应用，其特征在于，将所述细胞复活剂用于复原组织蜡块和生物芯片细胞。
6.根据权利要求5所述的细胞复活剂的应用，其特征在于，具体包括以下步骤 将需要复原的组织蜡块或生物芯片用细胞复活剂在37°C下浸润2小时。
7.根据权利要求6所述的细胞复活剂的应用，其特征在于，还包括以下步骤所述经过复原的组织蜡块或生物芯片在一 20摄氏度条 件下冷冻约2小时。
全文摘要
本发明公开了一种细胞复活剂及其制备方法和应用，该复活剂的体积百分比组成为异丙醇32-38%；一缩二甘油32-37%；丙三醇7-11%；水杨酸-羟基苯甲酸7-11%；乙酸7-11%；苯酚1-3%；d-芋烯0.25-0.45%；γ-松油烯0.18-0.38%；癸醛0.07-0.27%；辛醛0.18-0.38%；芳樟醇0.25-0.45%；柠檬醛0.31-0.51%；羊毛脂3.07-4.07%。本发明涉及组织芯片制备领域，用于病理组织蜡块的软化和生物芯片细胞的反胶联、活性转升，具有不损害组织结构和染色效果，并使处理过的标本或芯片达到新鲜蜡块组织柔软程度的优点。
文档编号G01N1/28GK102759470SQ20121026723
公开日2012年10月31日 申请日期2012年7月31日 优先权日2012年7月31日
发明者王虎 申请人:王虎