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专利名称：一种用于制备细胞蜡块的反应管的制作方法
技术领域：
本实用新型属于细胞工程技术领域，涉及细胞蜡块的制备，特别涉及一种用于制 备细胞蜡块的反应管。
背景技术：
随着“人类基因组计划”的完成，人类已经进入“功能基因组计划”，蛋白质组学是 “功能基因组计划”的重要研究内容。蛋白质结构和功能的多样性决定了蛋白质组学研究的 复杂性，尤其是新基因所编码的蛋白质的表达分布规律、结构和功能的揭示对生物学家来 说是极富挑战性的。研究蛋白质的表达分布规律最常用的方法是免疫组织化学染色技术， 它是利用特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗 原进行定性、定位、定量测定的一项技术。细胞蜡块在免疫组织化学染色中扮演着越来越重 要的角色。细胞蜡块是将体外培养的细胞、原代细胞或胸水、腹水等体液标本中的细胞离心 收集形成细胞团块，经固定后常规脱水、浸蜡、包埋后制成的，其优点是可制成多张切片并 可长期保存，进行一系列组织化学和免疫组化染色，或进行电镜、原位杂交等实验，对于研 究特定蛋白质在细胞和亚细胞水平的定位、表达水平及疾病的诊断和鉴别诊断等方面均具 有重要的意义。目前常用的细胞蜡块的制备方法大致可分为离心法和琼脂法两种。离心法制备细 胞蜡块是先把细胞离心收集到离心管底部，固定后再设法将细胞团块取出，之后常规制作 细胞蜡块。该方法的缺点是需要的细胞数量较大，对于原代细胞或临床标本来说不易达到 足够的细胞数量，再则，取出细胞团块容易造成团块破裂，则前功尽弃。琼脂法制备细胞蜡 块是将等量的琼脂溶液和细胞悬液混合，凝固后进行固定和蜡块制备，其缺点是细胞之间 相距较远，这样，在后续的免疫细胞化学染色中容易出现边缘效应而造成假阳性结果，另 外，细胞密度较小也给结果判定和摄片带来不便。因此，目前常用的细胞蜡块的制备方法无 法满足日益增长的科研和临床病理诊断的要求。

实用新型内容本实用新型解决的技术问题在于提供一种用于制备细胞蜡块的反应管，使用该反 应管制备细胞蜡块，时不再需要大量的细胞，细胞团块不会破碎，细胞蜡块中的细胞之间紧 密贴合，细胞蜡块的制备成功率得到很大的提高。本实用新型是通过以下技术方案来实现—种用于制备细胞蜡块的反应管，包括薄壁尖头的塑料反应管，在塑料反应管的 底部铺设有琼脂凝胶块。所述的琼脂凝胶块从底部铺设至塑料反应管一半的高度。所述的塑料反应管为PCR管。与现有技术相比，本实用新型具有以下有益的技术效果[0011]本实用新型通过在管壁光滑、薄壁尖头的塑料反应管的设计是为了便于细胞的细 心分离和细胞团块的与反应管的分离；在底部铺设含有蔗糖的琼脂凝胶块，用于制备细胞 团块时，使得细胞分离沉淀在凝胶块之上，在细胞团块形成后，切除反应管的底部，将凝胶 块与细胞团块一并从开口处顶出，这样使得所形成的细胞团块形状完整，只要将存在明显 分层的细胞团块与凝胶块剥离，就能够得到形状完整的细胞团块，克服了通常细胞团块分 离很容易破碎的缺陷，成功率可达100%。在形成细胞团块时形状完整，而且便于分离这样只需要控制分离的细胞浓度就容 易实现细胞团块的制备，不再需要大量的细胞，尤其方便制备来源稀少的细胞蜡块的制备。 由于通过离心形成沉积的细胞团块，细胞之间紧密贴合，可排除染色中的可能产生的边缘 效应所导致的假阳性结果，能够满足日益增长的科研和临床病理诊断的要求。

图1为细胞沉积在琼脂凝胶块上形成细胞团块的示意图；图2为切除塑料反应管的底部以取出细胞团块的示意图。其中1为塑料反应管；2为琼脂凝胶块；3为细胞团块。
具体实施方式
以下结合附图和制备细胞蜡块的具体操作对本实用新型做进一步详细描述，所述 是对本发明的解释而不是限定。如图1所示，一种用于制备细胞蜡块的反应管，包括薄壁尖头的塑料反应管1，在 塑料反应管1的底部铺设含有蔗糖的琼脂凝胶块2，薄壁尖头的设计是为了便于细胞离心 分离。具体可以采用PCR管来使用，根据制备细胞数量的多少取大小不同规格的薄壁PCR 管，细胞数量较少时，取用容量小的PCR管，以制备形状较好的细胞团块。所述的含有蔗糖的琼脂凝胶块的铺设为首先取Ig琼脂粉，加入IOOml质量浓度 为25 30%的蔗糖溶液中，加热至沸腾，置80°C烤箱备用；然后将准备好的热的蔗糖-琼 脂溶液加入PCR管中至半满，然后冷却在PCR管中形成琼脂凝胶块2，也即所形成琼脂凝胶 块2从PCR管的底部铺设至一半的高度。在PCR管的底部铺设形成琼脂凝胶块2之后，就可以进行细胞蜡块的制备1)将体外培养的细胞、原代细胞或胸水、腹水等体液标本中的细胞离心收集，弃上 清后以少量Hanks液、RPMI 1640培养基或PBS等类的等渗液体重悬，制备较浓的细胞悬液 (1 2X107/ml)；2)将细胞悬液加入形成琼脂凝胶块2的PCR管中，用水平转头2000r/min离心 5min,弃上清液，细胞沉积在琼脂凝胶块2上形成细胞团块3 ；3)将上述PCR管浸入中性福尔马林溶液中固定12h ；4)固定完成后，取出PCR管；然后用单面刀片小心切去PCR管底部分(如图2所 示)，轻轻用玻棒或加样器头把琼脂凝胶块2连同细胞团块3从PCR管开口部分顶出，最后 再小心将细胞团块3和琼脂凝胶块2琼脂分开，得到具有完整形状的细胞团块3 ；5)将形状完整的细胞团块3依常规的脱水、浸蜡、包埋后制作成细胞蜡块并切片。
权利要求1.一种用于制备细胞蜡块的反应管，其特征在于，包括薄壁尖头的塑料反应管(1)，在 塑料反应管(1)的底部铺设有琼脂凝胶块(2)。
2.如权利要求1所述的用于制备细胞蜡块的反应管，其特征在于，所述的琼脂凝胶块 (2)从底部铺设至塑料反应管(1) 一半的高度。
3.如权利要求1所述的用于制备细胞蜡块的反应管，其特征在于，所述的塑料反应管 ⑴为PCR管。
专利摘要本实用新型公开了一种用于制备细胞蜡块的反应管，包括薄壁尖头的塑料反应管，在塑料反应管的底部铺设琼脂凝胶块。通过在底部铺设琼脂凝胶块，用于制备细胞团块时，使得细胞分离沉淀在凝胶块之上，在细胞团块形成后，切除反应管的底部，将凝胶块与细胞团块一并从开口处顶出，这样使得所形成的细胞团块形状完整，只要将存在明显分层的细胞团块与凝胶块剥离，就能够得到形状完整的细胞团块，克服了通常细胞团块分离很容易破碎的缺陷，成功率可达100％。
文档编号G01N1/31GK201867329SQ201020502650
公开日2011年6月15日 申请日期2010年8月24日 优先权日2010年8月24日
发明者孙元杰, 宋朝君, 杨琨, 金伯泉, 魏玉英 申请人:中国人民解放军第四军医大学