一种斑点金免疫渗滤测定古代丝织品的方法
【专利摘要】本发明公开了一种斑点金免疫渗滤测定古代丝织品的方法，采用微孔滤膜作为载体，将抗原或抗体点在膜上，封闭后加待测样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原；可根据载体上有没有出现红色来进行定性分析。本发明的有益效果是：采用斑点金免疫渗滤的方法来检测古代丝织品，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面，成本低，反应时间短。
【专利说明】一种斑点金免疫渗滤测定古代丝织品的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于古代丝织品的检测，尤其涉及一种斑点金免疫渗滤测定古代丝织品的方法。
【背景技术】
[0002]丝织品由蚕丝编织而成，是中华民族智慧的结晶，是我国的宝贵遗产，但是蚕丝作为一种有机高分子材料，长期埋葬于墓葬环境中，必然会受到氧气、水、微生物等因素的影响而发生降解，以至于外观严重受到破坏而腐朽，肉眼根本无法识别。常规的检测方法有红外光谱分析，氨基酸分析，液相色谱分析等，但是由于糟朽丝织品杂质含量多，谱图解析困难，耗时长，灵敏度低，并且不能排除其它蛋白质的干扰，给研宄工作者带来了一定的困难。
【发明内容】
[0003]为此本发明要解决的技术问题是:针对上述现有的问题提供一种快速、直观、简便的古代丝织品检测方法。
[0004]为此采用如下技术方案:一种斑点金免疫渗滤测定古代丝织品的方法，其特征在于采用的步骤如下:
A)取三个规格为4X3X0.6cm塑料小盒，分别在盖子的中央打一个直径约为0.3-0.8cm的小孔；盖底填充两层吸水垫；吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜，即NC膜；然后在其中两个塑料盒子的NC膜上点加l_2ml 0.5-3mg/l的丝素蛋白溶液，室温下晾干，标记为I，II ;1为阳性对照，II为阴性对照；取lg丝织品的文物样，将其溶解在100ml PH为
7.4的磷酸盐缓冲中2h，取80-100 μ L的上清液，将其点加在NC膜上，室温下晾干，标记为III;
Β)在I，II，III小孔下面的NC膜上，滴加80-100 μ L的质量浓度为1%的牛血清蛋白溶液，保证溶液渗透到盒子内部；
C)在I，III小孔下面的NC膜上，滴加80-100μ L 50-100倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体溶液，保证溶液渗透到盒子内部；11小孔加入ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲溶液，溶液渗透到盒子内部；
D)在I，III小孔下面的NC膜上，滴加80-100μ L的ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲洗涤液，溶液渗透到盒子里，共洗涤三次；
Ε)在I，II，III小孔下面的NC膜上，滴加80-100 yL100-400倍稀释的胶体金标记的丝素蛋白抗体溶液，溶液渗透到盒子内部；
F)在I，II，III下面的NC膜上，滴加80-100μ L的PH为7.4的磷酸盐缓冲溶液，溶液渗透到盒子里，洗涤；共洗涤三次；
G)观察结果，I，III组的NC膜上有红色的斑点出现，II组的膜上没有红色斑点出现，说明检测的样品是丝织品。
[0005]本发明采用微孔滤膜作为载体，将抗原或抗体点在膜上，封闭后加待测样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原；可根据载体上有没有出现红色来进行定性分析。
[0006]本发明的有益效果是:采用斑点金免疫渗滤的方法来检测古代丝织品，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面，成本低，反应时间短。
【具体实施方式】
[0007]实施例1采用的步骤如下:
A)取三个规格为4X3X0.6cm塑料小盒，分别在盖子的中央打一个直径约为0.3cm的小孔；盖底填充两层吸水垫；吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜，即NC膜；然后在其中两个塑料盒子的NC膜上点加lml 0.5mg/l的丝素蛋白溶液，室温下晾干，标记为I，II ;1为阳性对照，II为阴性对照；取lg丝织品的文物样，将其溶解在100ml PH为7.4的磷酸盐缓冲中2h，取80 μ L的上清液，将其点加在NC膜上，室温下晾干，标记为III ；
Β)在I，II，III小孔下面的NC膜上，滴加80 μ L的质量浓度为1%的牛血清蛋白溶液，保证溶液渗透到盒子内部；
C)在I，III小孔下面的NC膜上，滴加80μ L 50倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体溶液，保证溶液渗透到盒子内部；11小孔加入ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲溶液，溶液渗透到盒子内部；
D)在I，III小孔下面的NC膜上，滴加80μ L的ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲洗涤液，溶液渗透到盒子里，共洗涤三次；
Ε)在I，II，III小孔下面的NC膜上，滴加80 μ L 100倍稀释的胶体金标记的丝素蛋白抗体溶液，溶液渗透到盒子内部；
F)在I，II，III下面的NC膜上，滴加80μ L的ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲溶液，溶液渗透到盒子里，洗涤；共洗涤三次；
G)观察结果，I，III组的NC膜上有红色的斑点出现，II组的膜上没有红色斑点出现，说明检测的样品是丝织品。
[0008]实施例2采用的步骤如下:
Α)取三个规格为4X3X0.6cm塑料小盒，分别在盖子的中央打一个直径约为0.6cm的小孔；盖底填充两层吸水垫；吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜，即NC膜；然后在其中两个塑料盒子的NC膜上点加1.5ml 2mg/l的丝素蛋白溶液，室温下晾干，标记为I，II ;1为阳性对照，II为阴性对照；取lg丝织品的文物样，将其溶解在100ml PH为7.4的磷酸盐缓冲中2h，取90 μ L的上清液，将其点加在NC膜上，室温下晾干，标记为III ；
Β)在I，II，III小孔下面的NC膜上，滴加90 μ L的质量浓度为1%的牛血清蛋白溶液，保证溶液渗透到盒子内部；
C)在I，III小孔下面的NC膜上，滴加90μ L 700倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体溶液，保证溶液渗透到盒子内部；11小孔加入ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲溶液，溶液渗透到盒子内部；
D)在I，III小孔下面的NC膜上，滴加90μ L的ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲洗涤液，溶液渗透到盒子里，共洗涤三次；
Ε)在I，II，III小孔下面的NC膜上，滴加90 μ L 300倍稀释的胶体金标记的丝素蛋白抗体溶液，溶液渗透到盒子内部；
F)在I，II，III下面的NC膜上，滴加90 μ L的ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲溶液，溶液渗透到盒子里，洗涤；共洗涤三次； G)观察结果，I，III组的NC膜上有红色的斑点出现，II组的膜上没有红色斑点出现，说明检测的样品是丝织品。
[0009]实施例3采用的步骤如下:
A)取三个规格为4X3X0.6cm塑料小盒，分别在盖子的中央打一个直径约为0.8cm的小孔；盖底填充两层吸水垫；吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜，即NC膜；然后在其中两个塑料盒子的NC膜上点加2ml 3mg/l的丝素蛋白溶液，室温下晾干，标记为I，II ;1为阳性对照，II为阴性对照；取lg丝织品的文物样，将其溶解在100ml PH为7.4的磷酸盐缓冲中2h，取100 μ L的上清液，将其点加在NC膜上，室温下晾干，标记为III ；
Β)在I，II，III小孔下面的NC膜上，滴加100 μ L的质量浓度为1%的牛血清蛋白溶液，保证溶液渗透到盒子内部；
C)在I，III小孔下面的NC膜上，滴加100μ L 100倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体溶液，保证溶液渗透到盒子内部；11小孔加入ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲溶液，溶液渗透到盒子内部；
D)在I，III小孔下面的NC膜上，滴加100μ L的ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲洗涤液，溶液渗透到盒子里，共洗涤三次；
Ε)在I，II，III小孔下面的NC膜上，滴加100 μ L 400倍稀释的胶体金标记的丝素蛋白抗体溶液，溶液渗透到盒子内部；
F)在I，II，III下面的NC膜上，滴加100μ L的ΡΗ为7.4的磷酸盐缓冲溶液，溶液渗透到盒子里，洗涤；共洗涤三次；
G)观察结果，I，III组的NC膜上有红色的斑点出现，II组的膜上没有红色斑点出现，说明检测的样品是丝织品。
【权利要求】
1.一种斑点金免疫渗滤测定古代丝织品的方法，其特征在于采用的步骤如下: A)取三个规格为4X3X0.6cm塑料小盒，分别在盖子的中央打一个直径约为.0.3-0.8cm的小孔；盖底填充两层吸水垫；吸水垫上面放置一片硝酸纤维素膜，即NC膜；然后在其中两个塑料盒子的NC膜上点加l_2ml 0.5-3mg/l的丝素蛋白溶液，室温下晾干，标记为I，II ;1为阳性对照，II为阴性对照；取Ig丝织品的文物样，将其溶解在100ml PH为.7.4的磷酸盐缓冲中2h，取80-100 μ L的上清液，将其点加在NC膜上，室温下晾干，标记为III; B)在I，II，III小孔下面的NC膜上，滴加80-100μ L的质量浓度为1%的牛血清蛋白溶液，保证溶液渗透到盒子内部； C)在I，III小孔下面的NC膜上，滴加80-100μ L 50-100倍稀释的兔抗丝素蛋白抗体溶液，保证溶液渗透到盒子内部；11小孔加入PH为7.4的磷酸盐缓冲溶液，溶液渗透到盒子内部； D)在I，III小孔下面的NC膜上，滴加80-100μ L的PH为7.4的磷酸盐缓冲洗涤液，溶液渗透到盒子里，共洗涤三次； Ε)在I，II，III小孔下面的NC膜上，滴加80-100 yL100-400倍稀释的胶体金标记的丝素蛋白抗体溶液，溶液渗透到盒子内部； F)在I，II，III下面的NC膜上，滴加80-100μ L的PH为7.4的磷酸盐缓冲溶液，溶液渗透到盒子里，洗涤；共洗涤三次； G)观察结果，I，III组的NC膜上有红色的斑点出现，II组的膜上没有红色斑点出现，说明检测的样品是丝织品。
【文档编号】G01N33/543GK104483479SQ201410845993
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月31日 优先权日:2014年12月31日
【发明者】刘苗苗, 王秉, 胡智文 申请人:浙江理工大学
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