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专利名称：丹参酮ⅱa磺酸钠及其制剂中丹参酮ⅰ磺酸钠的测定方法
技术领域：
本发明涉及丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠定性及定量测定的方法。
背景技术：
丹参酮IIA为活血化瘀中药丹参的有效成分，具有天然抗氧化作用。由于其难溶于水，肠道吸收差，经磺化后得到丹参酮IIA磺酸钠，具有很好的水溶性，可肌注和静脉给药，能增加冠脉流量，改善缺血区心肌的侧支循环及局部供血，改善缺氧心肌的代谢紊乱，提高心肌耐缺氧能力，抑制血小板聚集及及抗血栓形成，缩小缺血心肌梗死面积，在一定剂量下亦能增强心肌收缩力。用于冠心病、心绞痛、心肌梗死、室性早搏等心血管疾病的治疗。
丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中常混有丹参酮I磺酸钠，丹参酮IIA磺酸钠国家标准(WS-10001-(HD-0923)-2002)中采用薄层色谱法测定有关物质，采用杂质对照品法控制其中的丹参酮IIA及丹参酮I磺酸钠，两种物质的控制量分别为4.0％。通过试验检验，发现该方法杂质检出灵敏度低，重现性及定量的准确性均不好。另外，上述国家标准中采用分光光度法，以吸收系数测定丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮IIA磺酸钠的含量，此方法测定存在一定的误差，因为其中的杂质丹参酮I磺酸钠等在丹参酮IIA磺酸钠的测定波长处有吸收，这就造成测定含量的偏差。现有技术中有关采用高效液相色谱法(HPLC)检测丹参酮IIA的报道较多，但基本上采用甲醇一水为流动相，难以对丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIA及丹参酮I磺酸钠进行有效分离，而用HPLC的方法控制丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠含量的方法未见报道。并且对上述三种物质(丹参酮IIA磺酸钠、丹参酮IIA及丹参酮I磺酸钠)采用HPLC的方法在同一体系中控制含量的方法也未见报道。

发明内容
为了克服已有技术的不足，本发明的目的是要寻找一个能对丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠的含量进行精确测定的简便易行的测定方法。
本发明通过如下步骤实现本发明公开了一种丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠的测定方法，是由以下步骤组成1)采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶、十六烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶及氰基键合硅胶的至少一种为填充剂；以甲醇-乙腈-缓冲液为流动相，流动相中甲醇的体积比为0％～90％，乙腈的体积比为0％～90％，缓冲液的体积比为5％～90％，缓冲液的pH值为2～5；2)将样品注入高效液相色谱仪中，进行色谱分离，紫外检测。
上述的测定方法，所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液，体积比为5％～50％。所述的缓冲液也可以为三氟乙酸缓冲液，体积比为5％～50％。
上述的测定方法，所述的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液，乙腈与磷酸盐缓冲液的体积比为8∶2。上述的磷酸盐缓冲液最好为重量体积比0.2％的磷酸二氢钾溶液，磷酸调pH值至3.0。
本发明的含量测定方法，对丹参酮IIA磺酸钠中丹参酮I磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠及丹参酮IIA分离良好，峰面积对浓度呈良好的线性关系，可以准确测定丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠的含量，并具有测量简便、可靠的特点。


图1为实施例1的色谱2为实施例2的色谱3为实施例3的色谱4为实施例4的色谱5为实施例5的色谱6为实施例6的色谱中，1-丹参酮I磺酸钠，2-丹参酮IIA磺酸钠，3-丹参酮IIA
具体实施例方式下面将通过实施例对本发明作进一步的描述，这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。本领域的技术人员应理解，对本发明内容所作的等同替换，或相应的改进，仍属于本发明的保护范围之内。
实施例1 色谱条件 色谱柱diamonsil ODS(250×4.6mm，5μm)；流动相乙腈-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.0g，加水1000ml，用磷酸调pH值至3.0)(二组分体积比8∶2)，流速1ml/min；检测波长270nm；进样量20μl。在此色谱条件下，丹参酮I磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠及丹参酮IIA的保留时间分别为5.2分钟、6.0分钟及12.5分钟，各物质分离良好。以丹参酮I磺酸钠的峰面积对浓度作曲线，按最小二乘法计算回归方程和相关系数，相关系数r＝0.9994，说明峰面积对浓度呈良好的线性关系。(见附图1)实施例2 色谱条件 色谱柱symmetryshield RP18(3.9×150mm，5μm)；流动相甲醇-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢铵3.45g，加水1000ml，用磷酸调pH值至3.3)(二组分体积比65∶35)，流速1ml/min；检测波长270nm；进样量20μl。在此色谱条件下，丹参酮I磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠及丹参酮IIA的保留时间分别为3.7分钟、4.4分钟及21.8分钟，各物质分离良好。以丹参酮I磺酸钠的峰面积对浓度作曲线，按最小二乘法计算回归方程和相关系数，相关系数r＝0.9992，说明峰面积对浓度呈良好的线性关系。(见附图2)实施例3 色谱条件 色谱柱inertsil CN-3(4.6×150mm，5μm)；流动相甲醇-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢铵3.45g，加水1000ml，用磷酸调pH值至3.3)(二组分体积比65∶35)，流速1ml/min；检测波长270nm；进样量20μl。在此色谱条件下，丹参酮IIA、丹参酮IIA磺酸钠及丹参酮I磺酸钠的保留时间分别为4.1分钟、6.0分钟及6.6分钟，各物质分离良好。以丹参酮I磺酸钠的峰面积对浓度作曲线，按最小二乘法计算回归方程和相关系数，相关系数r＝0.9987，说明峰面积对浓度呈良好的线性关系。(见附图3)实施例4 色谱条件 色谱柱symmetryshield RP18(3.9×150mm，5μm)；流动相乙腈-0.1％三氟乙酸溶液(二组分体积比50∶50)，流速1ml/min；检测波长270nm；进样量20μl。在此色谱条件下，丹参酮I磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠及丹参酮IIA的保留时间分别为3.1分钟、3.5分钟及34.2分钟，各物质分离良好。以丹参酮I磺酸钠的峰面积对浓度作曲线，按最小二乘法计算回归方程和相关系数，相关系数r＝0.9990，说明峰面积对浓度呈良好的线性关系。(见附图4)实施例5 色谱条件 色谱柱diamonsil ODS(250×4.6mm，5μm)；流动相乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.0g，加水1000ml，用磷酸调pH值至3.0)(三组分体积比76∶4∶20)，流速1ml/min；检测波长270nm；进样量20μl。在此色谱条件下，丹参酮I磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠及丹参酮IIA的保留时间分别为6.5分钟、7.7分钟及16.5分钟，各物质分离良好。以丹参酮I磺酸钠的峰面积对浓度作曲线，按最小二乘法计算回归方程和相关系数，相关系数r＝0.9992，说明峰面积对浓度呈良好的线性关系。(见附图5)实施例6 色谱条件 色谱柱diamonsil ODS(250×4.6mm，5μm)；流动相乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.0g，加水1000ml，用磷酸调pH值至3.0)(三组分体积比5∶90∶5)，流速1ml/min；检测波长270nm；进样量20μl。在此色谱条件下，丹参酮I磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠及丹参酮IIA的保留时间分别为6.7分钟、7.6分钟及8.4分钟，各物质分离良好。以丹参酮I磺酸钠的峰面积对浓度作曲线，按最小二乘法计算回归方程和相关系数，相关系数r＝0.9992，说明峰面积对浓度呈良好的线性关系。(见附图6)实施例7 照上述几个实施例，按如下方法对丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠及丹参酮IIA进行分离并对丹参酮I磺酸钠进行定量取丹参酮I磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠及丹参酮IIA对照品适量，用水制成每1ml中含丹参酮I磺酸钠2μg、丹参酮IIA磺酸钠100μg及丹参酮IIA 1μg的溶液，作为对照品溶液；另取供试品适量，加水制成每1ml中含丹参酮IIA磺酸钠100μg的溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。
试验结果表明，本发明对丹参酮IIA磺酸钠中丹参酮I磺酸钠、丹参酮IIA磺酸钠及丹参酮IIA分离良好。可以准确测定丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠的含量。
权利要求
1.一种丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠的测定方法，其特征在于是由以下步骤组成，1)采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶、十六烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶及氰基键合硅胶的至少一种为填充剂；以甲醇—乙腈—缓冲液为流动相，流动相中甲醇的体积比为0％～90％，乙腈的体积比为0％～90％，缓冲液的体积比为5％～90％，缓冲液的pH值为2～5；2)将样品注入高效液相色谱仪中，进行色谱分离，紫外检测。
2.根据权利要求1所述的丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠的测定方法，其特征在于所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液，体积比为5％～50％。
3.根据权利要求1所述的丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠的测定方法，其特征在于所述的缓冲液为三氟乙酸溶液，体积比为5％～50％。
4.根据权利要求1所述的丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠的测定方法，其特征在于所述的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为乙腈—磷酸盐缓冲液，乙腈与磷酸盐缓冲液的体积比为8∶2。
5.根据权利要求4所述的丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠的测定方法，其特征在于所述的磷酸盐为重量体积比0.2％的磷酸二氢钾溶液，磷酸调pH值至3.0。
全文摘要
本发明涉及丹参酮IIA磺酸钠及其制剂中丹参酮I磺酸钠定性及定量测定的方法。本发明是由以下步骤组成1)采用高效液相色谱法，用十八烷基硅烷键合硅胶、十六烷基硅烷键合硅胶、辛烷基硅烷键合硅胶及氰基键合硅胶的至少一种为填充剂；以甲醇－乙腈－缓冲液为流动相，流动相中甲醇的体积比为0％～90％，乙腈的体积比为0％～90％，缓冲液的体积比为5％～90％，缓冲液的pH值为2～5；2)将样品注入高效液相色谱仪中，进行色谱分离，紫外检测。本发明具有精确度高、测量简便、可靠的特点。
文档编号G01N30/00GK1624474SQ20041003605
公开日2005年6月8日 申请日期2004年11月3日 优先权日2004年11月3日
发明者孟凡清, 蔡西武 申请人:济南百诺医药科技开发有限公司