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专利名称：免疫生物芯片再生方法及再生免疫生物芯片的制作方法
技术领域：
本发明涉及免疫生物芯片再生方法及再生免疫生物芯片。
背景技术：
生物芯片，通过将抗体、核酸等生物分子固定在芯片基体上，用感知器探測生物分子的力、热、光、电等物理信息，从而探測到生物分子的信息，其为人类探知与生命相关的信息提供了途径。免疫生物芯片是生物芯片的ー种，用于探测和免疫现象有关的生物分子信息，并将探測到的信息转化成电信号，以便处理，是免疫学研究、疾病诊断、治疗和防治的重要工具。但是，现阶段，免疫生物芯片制造エ艺复杂，成本高昂，而将使用过的免疫生物芯片再生能够降低使用生物芯片的成本。 然而，目前的免疫生物芯片再生方法仍有待改进。

发明内容
本发明是基于发明人的下列发现而完成的对于检测抗原类型的芯片，再生的原理是将抗原从抗体上去除，可重新检测抗原；或者将抗原和抗体都去除，重新固定抗体。基于这些原理，对检测抗原类型的免疫生物芯片，现有的再生方法有电化学法、酸碱法、强氧化法以及替换法。然而，这些方法エ艺难度大、效率低、制造成本高，并且获得的再生免疫生物芯片的灵敏性较低，使用寿命有限。本发明g在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提供了检测抗原类型的免疫生物芯片再生方法。根据本发明的ー个方面，本发明提供了ー种免疫生物芯片再生方法，其中，免疫生物芯片包括芯片基体和第一抗体的Fe片段，该第一抗体的Fe片段形成于芯片基体上。根据本发明的实施例，该方法包括使用固定剂对免疫生物芯片进行固定化处理，以便使得第一抗体的Fe片段携带正电荷；以及将经过固定化处理的免疫生物芯片与全长第二抗体混合，以便使得全长第二抗体与携帯正电荷的第一抗体的Fe片段通过静电作用结合，从而形成携帯第二抗体的免疫生物芯片。根据本发明的具体示例，利用本发明的免疫生物芯片再生方法，能够有效地使免疫生物芯片再生,并且再生エ艺简单、需时少、效率高、再生成本低,获得的再生免疫生物芯片灵敏性高，使用寿命长。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，第一抗体的Fe片段是通过使用分解剂对全长第一抗体进行消化而得到的，其中，全长第一抗体形成于芯片基体上，并且全长第一抗体结合有抗原。由此，使用过的免疫生物芯片上的全长第一抗体经分解剂的消化处理后，仅保留芯片基体和形成于其上的第一抗体的Fe片段，从而基于本发明的免疫生物芯片再生方法后续的固定化处理以及与全长第二抗体混合，能够有效地获得再生免疫生物芯片，即携带第二抗体的免疫生物芯片。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，分解剂的种类不受特别限制。根据本发明的具体示例，分解剂可以为蛋白酶、强酸或强碱。其中，根据本发明的实施例，强酸的种类也不受特别限制。根据本发明的具体示例，强酸可以为选自盐酸、硫酸以及硝酸的至少ー种。根据本发明的实施例，强碱的种类也不受特别限制。根据本发明的具体示例，强碱可以为选自氢氧化钠和氢氧化钾的至少ー种。此外，根据本发明的实施例，蛋白酶的种类也不受特别限制。根据本发明的具体示例，蛋白酶可以为选自胃蛋白酶、胰蛋白酶以及木瓜蛋白酶的至少ー种，优选胃蛋白酶。这是因为，胃蛋白酶是专门分解包括抗体在内的蛋白质的ー种酶。当在本发明的免疫生物芯片再生方法中采用胃蛋白酶作为分解剂对全长第一抗体进行消化时，胃蛋白酶会在全长第一抗体的铰链区将其分解为三个片段，即两个Fab片段和ー个Fe片段，并且第一抗体的Fe片段保留在芯片基体上，而Fab片 段会在后续步骤中通过利用去离子水冲洗而去除。其中，胃蛋白酶的浓度、PH以及温度有一定的限制，本领域的技术人员可以根据实际实验情况进行选择。根据本发明的具体示例，分解剂为I 10g/L，pH = O. 5 2. O的胃蛋白酶水溶液。根据本发明的一些实施例，胃蛋白酶水溶液的温度为25 37°C。由此，能够充分有效地对全长第一抗体进行消化。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，使用分解剂对全长第一抗体进行消化的时间不受特别限制，本领域的技术人员可以根据实际实验情况选择最适的消化时间。根据本发明的具体示例，使用分解剂对全长第一抗体进行消化5 10分钟。由此，能够充分有效地对全长第一抗体进行消化。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，第一抗体的Fe片段是通过使用洗脱剂对免疫生物芯片进行处理而得到的，其中，免疫生物芯片进一歩包括全长第三抗体，其与第一抗体的Fe片段通过静电结合，并且全长第三抗体结合有抗原。由此，通过本发明的免疫生物芯片再生方法再生过，并再次使用过的免疫生物芯片经洗脱剂处理后，仅保留芯片基体和形成于其上的第一抗体的Fe片段，从而基于本发明的免疫生物芯片再生方法后续的固定化处理以及与全长第二抗体混合，能够有效地获得再生免疫生物芯片，即携带第二抗体的免疫生物芯片。通过使用洗脱剂对免疫生物芯片进行处理而得到第一抗体的Fe片段，其原理是，洗脱剂富含大量的阴离子，带负电荷，从而其能够和新固定的抗体(即全长第三抗体)竞争结合在残留的抗体Fe片段上，进而能够将新抗体(即全长第三抗体)以及其上结合的抗原从免疫生物芯片上去除。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，洗脱剂的种类不受特别限制。根据本发明的具体示例，洗脱剂可以为选自强酸或强碱的任意一种。其中，根据本发明的实施例，强酸的种类也不受特别限制。根据本发明的具体示例，强酸可以为选自盐酸、硫酸以及硝酸的至少ー种。根据本发明的实施例，强碱的种类也不受特别限制。根据本发明的具体示例，强碱可以为选自氢氧化钠和氢氧化钾的至少ー种，优选氢氧化钠。其中，氢氧化钠的浓度和PH有一定的限制，本领域的技术人员可以根据实际实验情况进行选择。根据本发明的具体示例，洗脱剂为O. 04 4g/L，pH = 11. O 13. O的氢氧化钠水溶液。由此，能够有效地将全长第三抗体及抗原从芯片基体上去除。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，使用洗脱剂对免疫生物芯片进行处理的时间不受特别限制，本领域的技术人员可以根据实际实验情况选择最适的处理时间。根据本发明的具体示例，使用洗脱剂对免疫生物芯片进行处理5 10分钟。由此，能够有效地将全长第三抗体及抗原从芯片基体上去除。
此外，偶联剂可以促使抗体和芯片基体之间以共价键连接。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，利用偶联剂使第一抗体的Fe片段与芯片基体相连。其中，根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，第一抗体的Fe片段与芯片基体之间的偶联剂的种类并不受特别限制，即所采用的偶联剂的种类并不限制免疫生物芯片适用本发明的免疫生物芯片再生方法。根据本发明的ー些具体示例，偶联剂可以为选自娃烧试剂、闻分子聚合物、疏基烧醇和疏基酸的至少一种。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，进行固定化处理之前以及之后，进ー步包括将免疫生物芯片以及经过固定化 处理的免疫生物芯片进行清洗的步骤。根据本发明的实施例，可以利用去离子水进行前述清洗5次。固定剂的阳离子带正电荷，能够和携带负电荷的第一抗体的Fe片段通过静电作用结合，并使得第一抗体的Fe片段携带正电荷，从而能够有利于后续步骤的进行，即将经过固定化处理的免疫生物芯片与全长第二抗体混合后，能够方便有效地将全长第二抗体固定于芯片基体上，从而能够成功获得携帯第二抗体的免疫生物芯片。因此，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，使用固定剂对所述免疫生物芯片进行固定化处理。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，固定剂的种类不受特别限制。根据本发明的具体示例，固定剂可以为氨水(NH4OH)、金属氯化盐、金属硫酸盐或金属氰化盐，其中，金属氯化盐可以为选自三氯化铁、氯化铜、氯化铝和氯化锰的至少ー种，金属硫酸盐可以为选自硫酸铁、硫酸亚铁、硫酸铝和硫酸锰的至少ー种，金属氰化盐可以为选自氰化铁、氰化铜和氰化锰的至少ー种。根据本发明的一些实施例，优选地，固定剂为氨水或三氯化铁，更优选为I %体积浓度的氨水溶液或者10 30g/L的三氯化铁的水溶液。根据本发明的实施例，进行固定化处理的时间不受特别限制。根据本发明的具体示例，可以进行固定化处理5 10分钟。由此，全长的第二抗体或者第三抗体能够被充分地固定在第一抗体的Fe片段上。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，全长第二抗体以全长第二抗体的缓冲液的形式提供。在本说明书中所使用的表达方式“全长第二抗体的缓冲液”，是指全长第二抗体与缓冲液的混合溶液。其中，这里所采用的缓冲液的种类不受特别限制，例如可以采用磷酸盐缓冲液。由此，根据本发明的ー些具体示例，全长第二抗体可以以全长第二抗体的磷酸盐缓冲液的形式提供，即以全长第二抗体与缓冲液的混合溶液的形式提供。具体地，根据本发明的实施例，全长第二抗体的磷酸盐缓冲液是全长第二抗体和PH=7. O 7. 5的磷酸盐缓冲液的混合溶液，且在全长第二抗体的磷酸盐缓冲液中，全长第二抗体的浓度为50 100mg/L，磷酸盐的浓度为O. 03 O. 5mol/L。由此，全长第二抗体在磷酸盐缓冲液中带电荷，能和第一抗体的Fe片段静电结合。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，将经过固定化处理的免疫生物芯片与全长第二抗体混合的时间不受特别限制，本领域的技术人员可以根据实际实验情况选择合适的混合时间。根据本发明的具体示例，可以将经过固定化处理的免疫生物芯片与全长第二抗体混合5 10分钟。由此，全长第二抗体能充分地结合在经过固定化处理的免疫生物芯片上。根据本发明的实施例，本发明的免疫生物芯片再生方法，可以进一歩包括利用封闭剂将携帯第二抗体的免疫生物芯片进行封闭处理的步骤。根据本发明的实施例，封闭剂可以为选自牛血清白蛋白、脱脂奶粉、小牛血清、羊血清和络蛋白的至少ー种，优选牛血清白蛋白磷酸盐缓冲液。其中，根据本发明的实施例，牛血清白蛋白磷酸盐缓冲液是通过将I 5g/L的牛血清白蛋白溶解于pH = 7. 4的磷酸盐缓冲液中获得的。根据本发明的实施例，在本发明的免疫生物芯片再生方法中，进行封闭处理的时间不受特别限制。根据本发明的ー些具体示例，可以进行封闭处理5 10分钟。由此，未被全长第二抗体或者全长第三抗体占领的第一抗体的Fe片段的结合位置，能够被封闭剂占领，从而能够避免待检测的抗原结合于第一抗体的Fe片段上，造成假阳性干扰。需要说明的是，在本文中所使用的术语“第一”、“第二”、“第三”仅用于描述目的，以便能够方便地区别固 定在芯片基体上的不同种类的抗体，而不能理解为指示或暗示相对重要性，或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括ー个或者更多个该特征。根据本发明的另一方面，本发明提供了ー种再生免疫生物芯片。根据本发明的实施例，该再生免疫生物芯片是由本发明的免疫生物芯片再生方法获得的。发明人发现，本发明的再生免疫芯片灵敏性高，成本低，使用寿命长，能够有效地用于探测与免疫现象有关的生物分子信息。需要说明的是，本发明的免疫生物芯片再生方法及再生免疫生物芯片，是本申请的发明人通过艰苦的创造性劳动和优化的工作而完成的，并且，与传统的免疫生物芯片再生方法及再生免疫生物芯片相比，其具有如下优点(I)再生成本可控制。在本发明的免疫生物芯片再生方法中，除抗体外，所用到的分解剂、洗脱剂、固定剂和封闭剂均为常见的化学试剂，成本可以控制。以人工操作为例，以IL体系溶液再生芯片100次计算(1L体系溶液是指，在本发明的方法中，使用分解剂、洗脱齐U、固定剂和封闭剂等溶液进行各步骤时，均采用IL容积的容器，即将芯片依次浸没于IL的各试剂溶液中再生)，利用本发明的免疫生物芯片再生方法进行免疫生物芯片再生，需要用到胃蛋白酶I 10g，30%浓度的氨水(NH4OH) 3. 3L，氢氧化钠O. I 10g，牛血清白蛋白100 500g(其中，具体计算过程如下分解剂溶液需使用I次，则需要IL ;洗脱剂溶液需要使用99次，需要99L ;固定剂和封闭剂均需要使用100次，则各需100L。假如各试剂溶液均采用优选的，根据各试剂溶液的浓度(胃蛋白酶I 10g/L，氢氧化钠O. 04 4g/L，氨水体积浓度I %，牛血清白蛋白I 5g/L)计算得出，共需要胃蛋白酶I 10g，氢氧化钠3. 96 396g，30%浓度的氨水3. 33L，牛血清白蛋白100 500g)。而一般的免疫生物芯片的体积为I 10cm3，IL溶液体系可同时再生的芯片数目为100 1000片，且以上各试剂的量是以再生芯片100次计算获得，因此，每只芯片的平均再生成本可控制在较低的水平。而如果采用自动化的微流体芯片，每只芯片的平均再生成本则更可降低一到两个数量级。(2)再生时间可控制。采用人工操作实施本发明的免疫生物芯片再生方法吋，再生时间为30 50分钟；使用自动化的微流体芯片进行本发明的免疫生物芯片再生方法吋，每次再生的时间可降至20分钟以内。(3)对再生设备要求低。可在25 37°C的水浴锅或者恒温箱中实施本发明的免疫生物芯片再生方法。(4)再生次数可达到100次以上。通过本发明的免疫生物芯片再生方法获得的再生免疫生物芯片，由于最初固定的抗体(第一抗体)的Fe芯片被保留，新固定的抗体(全长第二抗体)会结合在残留的抗体Fe片段上，芯片的灵敏度(最小可检测的抗原浓度)不会随着再生次数的增加而下降，因此本发明的再生免疫生物芯片可被再生100次以上。(5) 在本发明的免疫生物芯片再生方法中，可固定不同种类的抗体，即全长第二抗体可以为几种不同种类的抗体(最多为10种不同种类的抗体)的组合，由此，一只芯片最多可检测10种抗原指标，当需要检测20种抗原指标时，检测10种指标后将芯片再生一次，在芯片上固定10种新的抗体，以便检测剩余10种抗原指标，从而基于本发明的免疫生物芯片再生方法，分两次进行再生及检测，能够有效地实现芯片分批次地检测多种抗原的指标。(6)可利用本发明的免疫生物芯片再生方法进行再生的芯片种类很丰富。例如阵列芯片、芯片实验室(Lab-on-chip)、微流体芯片等免疫生物芯片均可通过本发明的免疫生物芯片再生方法进行再生。(7)本发明的免疫生物芯片再生方法对芯片表面的材料无特殊要求。表面为金属、半导体、有机物、金属氧化物、无机非金属等材料的芯片，均可利用本发明的免疫生物芯片再生方法进行再生。(8)本发明的免疫生物芯片再生方法对芯片表面的结构无特殊要求。因为，和抗体直接接触的区域不需要引出金属线，形成导电结构，则芯片表面可以是含沟槽结构的微流体芯片，也可以是无沟槽结构的其他芯片。(9)本发明的免疫生物芯片再生方法对芯片再生前抗体的偶联剂(即第一抗体与芯片基体之间的偶联剂)无特殊要求，可以是硅烷试剂，例如可以为选自3-缩水甘油羟丙基ニ甲氧基娃烧、3-氨丙基ニ甲基单こ氧基娃烧和3-氨丙基ニこ氧基娃烧的至少一种；可以是高分子聚合物，例如可以为选自氨基葡聚糖、羧基葡聚糖、双氨基聚こニ醇、双羧基聚こニ醇、壳聚糖和聚哌嗪的至少ー种；也可以是巯基烷醇或巯基酸，例如可以为选自巯基甲醇、2-巯基こ醇、3-巯基丙醇，4-巯基丁醇、5-巯基戊醇、6-巯基季醇、7-巯基庚醇、8-巯基辛醇、9-巯基壬醇、10-巯基癸醇、11-巯基十一烷醇、12-巯基十二烷醇、13-巯基十三烷醇、14-巯基十四烷醇、15-巯基十五烷醇、16-巯基十六烷醇、17-巯基十七烷醇和18-巯基十八烷醇中的至少ー种或其衍生酸。(10)本发明的再生免疫生物芯片的生物活性保存时间可达到50天。本发明的再生免疫生物芯片上的抗体，即全长第二抗体，可以在PBS溶液中稳定地保存，不会被氧化或者分解。本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。


本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中图I显示了根据本发明一个实施例的免疫生物芯片再生方法的流程示意图；图2显示了根据本发明另ー个实施例的免疫生物芯片再生方法的流程示意图；以及图3显示了根据本发明另ー个实施例的免疫生物芯片再生方法的流程示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，需要说明的是下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。一般方法參照 图1，本发明的免疫生物芯片再生方法可以包含以下步骤首先，将包含第一抗体的Fe片段及芯片基体的免疫生物芯片置于固定剂溶液中浸泡5 IOmin,以便使用固定剂对免疫生物芯片进行固定化处理,使得第一抗体的Fe片段携帯正电荷；其次，利用去离子水将经过固定化处理的免疫生物芯片冲洗5次；然后，将经过冲洗的免疫生物芯片与全长第二抗体混合，以便使得全长第二抗体与携帯正电荷的第一抗体的Fe片段通过静电作用结合，从而形成携帯第二抗体的免疫生物芯片，即获得再生免疫生物芯片，具体地，将经过冲洗的免疫生物芯片置于全长第二抗体的磷酸盐缓冲液(PBS)中浸泡15 20min。其中，全长第二抗体的磷酸盐缓冲液是全长第ニ抗体和pH = 7. O 7. 5的磷酸盐缓冲液的混合溶液，且在全长第二抗体的磷酸盐缓冲液中，全长第二抗体的浓度为50 100mg/L,磷酸盐的浓度为O. 03 O. 5mol/L。实施例I參照图2，本发明的免疫生物芯片再生方法还可以包含以下步骤首先，将包含结合有抗原的全长第一抗体以及芯片基体的芯片置于分解剂溶液中浸泡5 lOmin，以便使用分解剂对全长第一抗体进行消化，将其分解为两个Fab片段和ー个Fe片段，该Fe片段称为第一抗体的Fe片段，其中，所用的分解剂为I 10g/L，pH =O. 5 2. O的胃蛋白酶水溶液，溶液温度为25 37°C ；其次，利用去离子水将经过分解剂的消化处理的免疫生物芯片冲洗5次，以便去除两个Fab片段；接着,将经过冲洗的免疫生物芯片置于固定剂溶液中浸泡5 IOmin,以便使用固定剂对免疫生物芯片进行固定化处理，使得第一抗体的Fe片段携带正电荷，其中，所用的固定剂可以是I %体积浓度的氨水(NH4OH)溶液；接下来，利用去离子水将经过固定化处理的免疫生物芯片冲洗5次；然后，将经过冲洗的免疫生物芯片与全长第二抗体混合，以便使得全长第二抗体与携帯正电荷的第一抗体的Fe片段通过静电作用结合，从而形成携帯第二抗体的免疫生物芯片，具体地，将经过冲洗的免疫生物芯片置于全长第二抗体的磷酸盐缓冲液(PBS)中浸泡15 20min。其中，全长第二抗体的磷酸盐缓冲液是全长第二抗体和pH = 7. O 7. 5的磷酸盐缓冲液的混合溶液，且在全长第二抗体的磷酸盐缓冲液中，全长第二抗体的浓度为50 100mg/L,磷酸盐的浓度为0. 03 0. 5mol/L。然后，将携带第二抗体的免疫生物芯片置于pH = 7. 4的PBS溶液中，并于4°C冰箱中保存，备用。由此，获得的携帯第二抗体的免疫生物芯片，即再生免疫生物芯片，能够有效地与相应的抗原结合，从而能够有效地用于相应抗原的检测。此外，在将带第二抗体的免疫生物芯片进行保存前，还可以进ー步包括利用封闭剂将携帯第二抗体的免疫生物芯片进行封闭处理的步骤，具体地，将携带第二抗体的免疫生物芯片置于封闭剂中浸泡5 lOmin，其中所用的封闭剂为牛血清白蛋白磷酸盐缓冲液，其是通过将I 5g/L的牛血清白蛋白(BSA)溶解于pH = 7. 4的PBS溶液中获得的。本实施例所述的本发明的免疫生物芯片再生方法，能够去除结合在全长第一抗体上的抗原，分解结合在芯片基体上的全长第一抗体，使其消除免疫生物活性，且不影响再生后的免疫反应，井能够有效地在芯片基体上固定新的抗体，即全长第二抗体。此外，需要说明的是，本实施例所述的免疫生物芯片再生方法适于对免疫生物芯片进行第一次再生。实施例2參照图3，本发明 的免疫生物芯片再生方法还可以包含以下步骤首先，将包含结合有抗原的全长第三抗体、第一抗体的Fe片段以及芯片基体的芯片置于洗脱剂溶液中浸泡5 lOmin，以便使用洗脱剂对免疫生物芯片进行处理，将结合有抗原的全长第三抗体从第一抗体的Fe片段上分离，其中，所用洗脱剂为O. 04 4g/L，pH =
11.O 13. O的氢氧化钠(NaOH)水溶液；其次，利用去离子水将经过洗脱剂处理的免疫生物芯片冲洗5次，以便去除结合有抗原的全长第三抗体；接着,将经过冲洗的免疫生物芯片置于固定剂溶液中浸泡5 IOmin,以便使用固定剂对免疫生物芯片进行固定化处理，使得第一抗体的Fe片段携带正电荷，其中，所用的固定剂可以是I %体积浓度的氨水(NH4OH)溶液；接下来，利用去离子水将经过固定化处理的免疫生物芯片冲洗5次；然后，将经过冲洗的免疫生物芯片与全长第二抗体混合，以便使得全长第二抗体与携帯正电荷的第一抗体的Fe片段通过静电作用结合，从而形成携帯第二抗体的免疫生物芯片，具体地，将经过冲洗的免疫生物芯片置于全长第二抗体的磷酸盐缓冲液(PBS)中浸泡15 20min。其中，全长第二抗体的磷酸盐缓冲液是全长第二抗体和pH = 7. O 7. 5的磷酸盐缓冲液的混合溶液，且在全长第二抗体的磷酸盐缓冲液中，全长第二抗体的浓度为50 100mg/L,磷酸盐的浓度为O. 03 O. 5mol/L。然后，将携带第二抗体的免疫生物芯片置于pH = 7. 4的PBS溶液中，并于4°C冰箱中保存，备用。由此，获得的携带第二抗体的免疫生物芯片，即再生免疫生物芯片，能够有效地与相应的抗原结合，从而能够有效地用于相应抗原的检测。此外，在将携带第二抗体的免疫生物芯片进行保存前，还可以进ー步包括利用封闭剂将携帯第二抗体的免疫生物芯片进行封闭处理的步骤，具体地，将携带第二抗体的免疫生物芯片置于封闭剂中浸泡5 lOmin，其中所用的封闭剂为牛血清白蛋白磷酸盐缓冲液，其是通过将I 5g/L的牛血清白蛋白(BSA)溶解于pH = 7. 4的PBS溶液中获得的。本实施例所述的本发明的免疫生物芯片再生方法，能够去除结合在芯片基体上的结合有抗原的全长第三抗体，并在芯片基体上重新固定新的抗体，即全长第二抗体。此外，需要说明的是，本实施例所述的免疫生物芯片再生方法适于对使用过的本发明的再生免疫生物芯片进行再生。在本说明书的描述中，參考术语“ー个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“ー些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少ー个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解在不脱离本发明的原理和宗g的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本 发明的范围由权利要求及其等同物限定。
权利要求
1.一种免疫生物芯片再生方法，所述免疫生物芯片包括芯片基体和第一抗体的Fe片段，所述第一抗体的Fe片段形成于所述芯片基体上， 其中，所述方法包括 使用固定剂对所述免疫生物芯片进行固定化处理，以便使得所述第一抗体的Fe片段携带正电荷；以及 将经过固定化处理的免疫生物芯片与全长第二抗体混合，以便使得所述全长第二抗体与所述携带正电荷的第一抗体的Fe片段通过静电作用结合，从而形成携带第二抗体的免疫生物芯片。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述第一抗体的Fe片段是通过使用分解剂对全长第一抗体进行消化而得到的， 其中，所述全长第一抗体形成于所述芯片基体上，并且所述全长第一抗体结合有抗原， 任选地，所述分解剂为蛋白酶、强酸或强碱， 任选地，所述强酸为选自盐酸、硫酸以及硝酸的至少一种， 任选地，所述强碱为选自氢氧化钠和氢氧化钾的至少一种， 任选地，所述蛋白酶为选自胃蛋白酶、胰蛋白酶以及木瓜蛋白酶的至少一种，优选胃蛋白酶， 优选地，所述分解剂为I 10g/L，pH = 0. 5 2. 0的胃蛋白酶水溶液， 任选地，所述胃蛋白酶水溶液的温度为25 37°C， 任选地，使用分解剂对全长第一抗体进行消化5 10分钟。
3.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述第一抗体的Fe片段是通过使用洗脱剂对免疫生物芯片进行处理而得到的， 其中，所述免疫生物芯片进一步包括 全长第三抗体，所述全长第三抗体与所述第一抗体的Fe片段通过静电结合，并且所述全长第三抗体结合有抗原， 任选地，所述洗脱剂为选自强酸或强碱的任意一种， 任选地，所述强酸为选自盐酸、硫酸以及硝酸的至少一种， 任选地，所述强碱为选自氢氧化钠和氢氧化钾的至少一种， 优选地，所述洗脱剂为0. 04 4g/L，pH = 11. 0 13. 0的氢氧化钠水溶液， 任选地，使用洗脱剂对免疫生物芯片进行处理5 10分钟。
4.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，利用偶联剂使所述第一抗体的Fe片段与所述芯片基体相连， 任选地，所述偶联剂为选自硅烷试剂、高分子聚合物、巯基烷醇和巯基酸的至少一种。
5.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，进行所述固定化处理之前以及之后，进一步包括将所述免疫生物芯片以及所述经过固定化处理的免疫生物芯片进行清洗的步骤， 任选地，利用去离子水进行所述清洗5次。
6.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述固定剂为氨水、金属氯化盐、金属硫酸盐或金属氰化盐， 任选地，所述金属氯化盐为选自三氯化铁、氯化铜、氯化铝和氯化锰的至少一种，所述金属硫酸盐为选自硫酸铁、硫酸亚铁、硫酸铝和硫酸锰的至少一种，所述金属氰化盐为选自氰化铁、氰化铜和氰化锰的至少一种， 优选地，所述固定剂为I %体积浓度的氨水溶液或10 30g/L的三氯化铁水溶液， 任选地，进行所述固定化处理5 10分钟。
7.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，所述全长第二抗体以全长第二抗体的缓冲液的形式提供， 任选地，所述全长第二抗体以全长第二抗体的磷酸盐缓冲液的形式提供， 任选地，所述全长第二抗体的磷酸盐缓冲液是所述全长第二抗体和pH = 7. 0 7. 5的磷酸盐缓冲液的混合溶液，且在所述全长第二抗体的磷酸盐缓冲液中，所述全长第二抗体的浓度为50 100mg/L,磷酸盐的浓度为0. 03 0. 5mol/L。
8.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，将所述经过固定化处理的免疫生物芯片与所述全长第二抗体混合15 20分钟。
9.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，进一步包括利用封闭剂将所述携带第二抗体的免疫生物芯片进行封闭处理的步骤， 任选地，所述封闭剂为选自牛血清白蛋白、脱脂奶粉、小牛血清、羊血清和络蛋白的至少一种，优选牛血清白蛋白磷酸盐缓冲液， 任选地，所述牛血清白蛋白磷酸盐缓冲液是通过将I 5g/L的牛血清白蛋白溶解于pH=7. 4的磷酸盐缓冲液中获得的， 任选地，进行所述封闭处理5 10分钟。
10.一种再生免疫生物芯片，其特征在于，其是由权利要求1-9任一项所述的方法获得的。
全文摘要
本发明涉及免疫生物芯片再生方法及再生免疫生物芯片。其中，免疫生物芯片再生方法中所述的免疫生物芯片包括芯片基体和第一抗体的Fc片段，该第一抗体的Fc片段形成于芯片基体上，该方法包括使用固定剂对免疫生物芯片进行固定化处理，以便使得第一抗体的Fc片段携带正电荷；将经过固定化处理的免疫生物芯片与全长第二抗体混合，以便使得全长第二抗体与携带正电荷的第一抗体的Fc片段通过静电作用结合，从而形成携带第二抗体的免疫生物芯片。利用该方法能够方便高效地对免疫生物芯片进行再生。
文档编号G01N33/543GK102662053SQ20121011716
公开日2012年9月12日 申请日期2012年4月19日 优先权日2012年4月19日
发明者曲炳郡, 雷博 申请人:清华大学