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专利名称：一种采用反相高效液相色谱测定黄酒中草酸含量的方法
技术领域：
本发明涉及黄酒的分析检测方法，具体涉及利用邻苯二胺衍生草酸，再通过反相高效液相色谱测定黄酒中草酸含量的方法。
背景技术：
草酸即乙二酸，是最简单的有 机二元酸之一，广泛存在于动物、植物和微生物组织中。草酸为食品中的一种抗营养因子，若在日常饮食中摄入量过高，易造成草酸和钙离子结合形成草酸钙沉淀甚至导致结石，对人体健康产生危害。黄酒中也含有一定量的草酸，主要是由酿酒原料带入和发酵过程中的微生物代谢产生。成品黄酒中草酸含量与酿酒原料品质、酿造工艺及陈化贮存技术等因素有关，草酸含量高的成品酒其底部会出现草酸钙沉淀，严重损害成品黄酒的风味和品质，是困扰黄酒行业的难题，一旦出现沉淀，黄酒生产厂家就要对产品进行召回，造成巨大的经济损失。因此，为解决黄酒草酸钙沉淀问题，需要对酿酒原料和酿造过程中的草酸含量进行监控。目前，针对黄酒、啤酒和果酒中包括草酸在内的有机酸的检测方法主要有分光光度法、高效毛细管电泳法、气相色谱法、反相高效液相色谱法等，但均存在一定局限性。其中，分光光度法检测分辨率低、灵敏度差、易受其他物质的干扰、检测误差较大，而且由于黄酒颜色较深，比色效果不明显；高效毛细管电泳法检测分辨率高，但在检测草酸时高效毛细管电泳图谱基线严重倾斜，影响测定结果的准确性；气相色谱法要求有机酸具有较好的挥发性，但草酸沸点较高，不适合用该项技术进行检测；反相高效液相色谱是当今液相色谱最主要的分离模式，在食品、生物和医药领域均有广泛应用，在黄酒、啤酒和果酒有机酸的测定方面也有应用，但现有技术中直接用反相高效液相色谱方法测定草酸，存在草酸峰和酒石酸峰出峰重合、分离度不够的缺点，对草酸分辨率和检测灵敏度低，回收率不高，不能准确定量。

发明内容
本申请人针对现有黄酒草酸含量测定方法存在的上述缺陷，提供一种采用反相高效液相色谱测定黄酒中草酸含量的方法，该方法检测灵敏度高、对草酸分辨率高、重复性好、回收率高，能对黄酒中的草酸准确地定性和定量。本发明的技术方案如下一种采用反相高效液相色谱测定黄酒中草酸含量的方法，步骤如下(I)衍生处理将待测黄酒样品调节pH值至0. 5 I. 5，加入其体积的20 40%的邻苯二胺溶液，混匀后对所得溶液进行称重，并于100 120°C加热4 8h，冷却至室温后，加入双蒸水至溶液重量与加热前一致，所述邻苯二胺溶液的质量浓度为8 12g/L ；(2)进样前处理用NaOH调节上述溶液pH值至5. 0 6. 0，离心后收集上清液并用滤膜过滤，取滤液；(3)草酸标准样品的配制和处理配制草酸标准样品，并按照步骤(I) (2)所述方法对其进行处理；(4)色谱分析和数据处理进样，采用反相高效液相色谱系统对步骤(2)所得待测黄酒样品滤液和步骤(3)所得草酸标准样品滤液进行色谱分析和数据处理，分别得到所述待测黄酒样品滤液和草酸标准样品滤 液的液相色谱图以及所述两种滤液中草酸衍生物峰面积值，最后经公式计算得到待测黄酒样品中的草酸含量，所述公式如下
权利要求
1.一种采用反相高效液相色谱测定黄酒中草酸含量的方法，其特征在于步骤如下 (1)衍生处理将待测黄酒样品调节pH值至0.5 I. 5，加入其体积的20 40%的邻苯二胺溶液，混匀后对所得溶液进行称重，并于100 120°C加热4 8h，冷却至室温后，力口入双蒸水至溶液重量与加热前一致，所述邻苯二胺溶液的质量浓度为8 12g/L ； (2)进样前处理用NaOH调节上述溶液pH值至5.0 6. 0，离心后收集上清液并用滤膜过滤，取滤液； (3)草酸标准样品的配制和处理配制草酸标准样品，并按照步骤(I) (2)所述方法对其进行处理； (4)色谱分析和数据处理进样，采用反相高效液相色谱系统对步骤(2)所得待测黄酒样品滤液和步骤(3)所得草酸标准样品滤液进行色谱分析和数据处理，分别得到所述待测黄酒样品滤液和草酸标准样品滤液的液相色谱图以及所述两种滤液中草酸衍生物峰面积值，最后经公式计算得到待测黄酒样品中的草酸含量，所述公式如下
2.根据权利要求I所述采用反相高效液相色谱测定黄酒中草酸含量的方法，其特征在于步骤(I)所述草酸标准样品的质量浓度( 为100mg/L。
3.根据权利要求I所述采用反相高效液相色谱测定黄酒中草酸含量的方法，其特征在于步骤(4)所述色谱分析的条件为流动相为甲醇与乙酸铵，体积比为13:87 17 83；流动相流速为I. I I. 3mL/min ;进样量为40 60 y L ;色谱柱柱温为20 30°C ;检测波长为310 320nm。
全文摘要
本发明涉及一种采用反相高效液相色谱测定黄酒中草酸含量的方法，步骤如下利用衍生剂邻苯二胺在强酸(pH 0.5～1.5)、高温(100～120℃)条件下对黄酒中的草酸进行衍生处理，进样前调pH值、离心、过滤取滤液，草酸标准样品的配制和处理，采用反相高效液相色谱系统分别对待测黄酒样品和草酸标准样品进行色谱分析和数据处理，分别得到所述待测黄酒样品滤液和草酸标准样品滤液的液相色谱图以及所述两种滤液中草酸衍生物峰面积值，最后经公式计算得到待测黄酒样品中的草酸含量。本发明检测灵敏度高、对草酸分辨率高、重复性好、回收率高，能对黄酒中的草酸准确地定性和定量。
文档编号G01N30/36GK102735774SQ201210237798
公开日2012年10月17日 申请日期2012年7月10日 优先权日2012年7月10日
发明者孙军勇, 谭新勇, 陆健 申请人:江南大学