专利名称：中药琼玉膏中梓醇含量检测方法
技术领域：
本发明涉及中药技术领域。具体涉及中药琼玉膏中梓醇的含量检测方法。
背景技术：
中药琼玉膏的功能为补虚健脾，用于气阴不足，肺虚干咳，津枯形瘦，劳损失血。该药的处方成份为地黄640g、党参60g、茯苓120g、蜂蜜280g。中药琼玉膏的处方成分中的地黄为君药党参，茯苓和蜂蜜共为臣药。关对中药琼玉膏的质量标准，现行的检测仅对膏剂的“密度”作了规定，这是不科学的、不合理的，因为在中药提取过程中，随着时间的推移，中药当中的无效成分也随之被提取出来了，如淀粉类等。如果被提取出来无效成分越多，其密度值也会越高，这显然是不合理的；因此，对中药复方制剂中主要药物指标成分的测定，就显得十分重要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，设计合理的检测中药琼玉膏质量标准的方法。
本发明从中药琼玉膏的处方着手，因君药为地黄，故以检测地黄作为目标，用地黄的主要成分梓醇作为标准，建产梓醇含量的检测方法。
本发明经过试验，建产了用高效液相色谱法测定中药琼玉膏中梓醇的含量测定方法。
1、色谱条件与系统适应性试验(1)Agilent1100液相色谱仪，色谱柱Inertsil ODS-3 C18(长×内径150mm×4.6mm)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈(99.5～90.0∶0.5～10.0)为流动相，流速为0.1～1.0ml/min；采用DAD(VWD)检测器，检测波长为210nm；理论塔板数按梓醇峰计不低于3000～7000。
(2)流动相及检测波长的选择据文献资料报道，地黄中的梓醇以水-乙腈(99.5～90.0∶0.5～10.0)为流动相，流速为0.1～1.0ml/min时能与其他成份有效分离，在210nm处有最大吸收，(见表1、图1、图2)。然而在试验中，我们发现流速为0.1～1.0ml/min时，梓醇出峰时间较短，并不能与其他成份有效分离，而改流速为0.1～1.0ml/min时才达到了有效分离，(图5)。
表1 梓醇检测波长的试验结果
(3)标准对照品及样品以甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿作溶剂比用甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿为溶剂，其溶剂峰更�。吒榷ā�
2、对照品溶液的制备 取梓醇对照品适量，精密称定，制备成每1ml含0.4mg的溶液作为对照品溶液。
3、供试品溶液的制备 取本品约0.6g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿100ml、硅藻土、滑石粉或硅胶5g，超声、热回流或冷浸1小时；滤过，回收甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿，蒸干；以水溶解，转移至5ml的容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3、提取条件的选择用正交试验L8(27)考察比较了不同水平的溶剂、提取方法、提取时间及辅料用量对样品中梓醇的提取影响。
(1)表头设计确定因素为A溶媒(甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿)、B提取方法(超声、热回流或冷浸)、C提取时间、D辅料(硅藻土、滑石粉或硅胶)；各因素水平如下A150∶1(ml/g)；A2100∶1(ml/g)；B1超声、热回流或冷浸； B2超声、热回流或冷浸；C11小时； C22小时；D15∶1(g/g)； D110∶1(g/g)；L8 (27)表2
(2)数据与结果表2 样品提取的正交试验L8(27)
结果表明A2B1C2D1为最佳提取方法，即本实验6为最佳方案。
其中甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿用量为主要因素、提取时间和硅藻土、滑石粉或硅胶用量为次要因素、提取方法为最次因素。
经方差分析表明，除A因素水平变化对试验有一定影响外，其余因素水平变化对试验均没有影响。
考虑到实验省时、简便、节约的原则，故我们选定A2B1C1D1，即甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿100ml/g，超声、热回流或冷浸，1小时，硅藻土、滑石粉或硅胶5g/g。
4、测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每克含梓醇不得少于1.50mg。
5、方法学考查(1)空白试验 取缺地黄药材的供试品，依法测定，结果表明空白无干扰，见图4。
(2)线性范围 精密称取梓醇对照品20mg，置25ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成对照品储备液。
分别精密吸取上述对照品储备液1ml、2ml、3ml置5ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得线性溶液②、④、⑥；另精密吸取上述对照品储备液1ml置2ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得线性溶液⑤；另精密吸取上述对照品储备液1ml、3ml置10ml容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得线性溶液①和③。
分别精密吸取线性溶液①、②、③、④、⑤、⑥和对照品储备液(即线性溶液⑦)各5μl进样，以进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标作标准曲线。结果见表3。
表3 线性范围
(3)精密度试验日内精密度试验精密吸取对照品溶液一式6份进样，计算平均峰面积及RSD，结果见表4。
表4日内精密度试验结果
日间精密度试验精密吸取对照品溶液于2日内进样，计算平均峰面积及RSD，结果见表5。
表5 日间精密度试验结果
(4)稳定性试验取本品(批号030403)依法测定，分别于0小时、24小时进样，结果见表6。
表6 稳定性试验结果
(5)重现性试验取本品(批号030403)6份，依法测定，结果见表7。
表7 重现性试验结果
(6)回收率试验取本品(批号030402)3份，分别加入浓度为0.24mg/ml、0.48mg/ml、0.80mg/ml的对照品溶液各1ml，依法测定，结果见表8。
表8 回收率试验结果
(7)样品测定取本品3批，依法测定，结果见表9。
表9 样品测定结果
根据稳定性考查试验，含量限度宜定为本品每克含梓醇不得少于1.50mg。
6、对分离度的说明由于地黄药材中的梓醇峰和它前面的峰紧紧靠在一起，不易将其彻底分开，分离度大多在1.0～1.3之间，很少达到1.5；而理论塔板数则可达3000～7000。
本发明提供了中药琼玉膏中梓醇的含量检测方法，该方法包括下列步骤(1)高效液相色谱条件与系统适应性选择以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈99.5～90.0∶0.5～10.0为流动相，流速为0.1～1.0ml/min；采用DAD或VWD检测器，检测波长为210nm；理论塔板数按梓醇峰计不低于3000～7000；(2)对照品溶液的制备取梓醇对照品适量，精密称定，制备成每ml含0.4mg的溶液作为对照品溶液；(3)供试品溶液的制备取琼玉膏样品约0.6g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿60ml、硅藻土、滑石粉或硅胶3g，超声、热回流或冷浸1小时；滤过，回收甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿，蒸干；以水溶解，转移至5ml的容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
(4)测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定；(5)标准本品每克含梓醇不得少于1.50mg。
图1梓醇峰(zc-1、QYG00039.D)；图2、图3梓醇(zc)在不同波长处(210nm、254nm)的吸收比较(QYG00090.D～QYG00091.D)；图4缺地黄药材的空白样品(kby、QYG00047.D)；图5样品中的梓醇峰(zc、QYG00054.D)；本发明的方法对制备中药琼玉膏提供了检测其中君药“地黄”的指标成分，使产品的质量控制得到保障。
实例采用高效液相色谱，用本发明方法检测的21批中药琼玉膏中梓醇含量结果如下(1)色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈99.5～90.0∶0.5～10.0为流动相；流速为0.1～1.0ml/min；采用DAD或VWD检测器；检测波长210nm；理论塔板数按梓醇峰计不低于3000～7000；(2)供试品溶液的制备精蜜称取琼玉膏样品0.6g，置椎形瓶中，加甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿60ml、硅藻土、滑石粉或硅胶3g，超声、热回流或冷浸1小时；滤过，回收甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿，蒸干；以水溶解，转移至5ml的容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；(3)对照品溶液的制备取梓醇对照品适量，精密称定，制备成每ml含0.4mg的溶液作为照品溶液；分别精密吸收取对照品溶液和从试品溶液各5ul，注入液相色谱仪。
进行测定，检测数据见下表
权利要求
1.一种中药琼玉膏中梓醇含量检测方法，其特征在于该检测方法包括下列步骤(1)以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈99.5～90.0∶0.5～10.0为流动相，流速为0.1～1.0ml/min；采用DAD或VWD检测器，检测波长为210nm；理论塔板数按梓醇峰计不低于3000～7000；(2)对照品溶液的制备取梓醇对照品适量，精密称定，制备成每ml含0.4mg的溶液作为对照品溶液；(3)供试品溶液的制备取琼玉膏样品约0.6g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿60ml、硅藻土、滑石粉或硅胶3g，超声、热回流或冷浸1小时；滤过，回收甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、乙腈、水或氯仿，蒸干；以水溶解，转移至5ml的容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；(4)测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定；(5)标准本品每克含梓醇不得少于1.50mg。
全文摘要
本发明属于中药技术领域。本发明提供了中药琼玉膏中梓醇含量的检测方法。本发明以君药地黄为基础，通过正交设计方法，建产了地黄的主要成分梓醇含量的高效液相色谱测定方法。含量标准为每克含梓醇不得少于1.50mg。
文档编号G01N30/88GK1743841SQ20041008933
公开日2006年3月8日 申请日期2004年12月9日 优先权日2004年12月9日
发明者徐福莺, 邵宝平, 陈竞青, 李敏 申请人:上海雷允上药业有限公司
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