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专利名称：无毒害中药材辽细辛的检测方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，确切的说它涉及可期待中药材规范化种植研究的无毒害中药材辽细辛检测方法，确定无马兜铃酸的辽细辛的质量控制方法。
背景技术：
辽细辛为常用中药，各版药典均有记载，主产东北地区，以辽宁产者质量最佳，不含马兜铃酸，故而驰名中外，称辽细辛。辽细辛原植物为细辛Asarumheterotropoides Fr. Schmidt var.mandxhuricum (Maxim)Kitag.和汉城细辛Asarum sieboldii Miq.Var.seoulense Nakai.具祛风散寒，通窍止痛，温肺化饮作用，其主要药效成分为挥发油，具有解热、镇痛、镇静、抗惊厥、麻醉等药理作用。
中药材资源比其他生物资源具有更强的地域性，所以中医药一直强调使用中药时应选用道地药材。道地药材是指在一特定自然条件、生态环境的地域内所产生的药材，其生产较为集中，栽培技术、采收、加工也都有一定讲究，较其他地区所产同种药材品质佳、疗效好。辽细辛始载于《神农本草经》，列为上品，陶弘景称“今用东阳临海者形段乃好，辛烈不及华阴高丽者。”高丽(今本溪、桓仁一带)于今辽细辛产地一致。现代研究表明细辛的有效成分为挥发油，挥发油中主要含甲基丁香酚、黄樟醚和榄香脂素，挥发油含量的总和辽宁产为2.92％，华细辛为2.68％。所以辽宁产细辛品质最好，药效最佳。辽宁是其道地产区，故而驰名中外。但是如何对辽细辛进行检测就显得很重要，目前尚无规范化的检测方法。

发明内容
本发明的目的在于提供规范化种植的无毒害中药材辽细辛的检测方法。本发明的特点在于将中药辽细辛采用高效液相、气相色谱进行含量测定，制定指纹图谱以及确定马兜铃酸的检测方法。
提供上述中药辽细辛的检测方法，其特征主要包括高效液相、气相指纹图谱的制定切实可行；马兜铃酸的检测方法简便、准确。
提供上述中药辽细辛的检测方法，其中包括；a挥发油的气相检测法。采用《中国药典》2000年版一部挥发油提取法提取挥发油，经环己烷溶解，注入气相色谱-质谱联用色谱议中，绘制指纹图谱，并制定质量标准，经计算机分析结果，得到甲基丁香酚、黄樟醚、肉豆蔻醚等28个峰，其中主要成分甲基丁香酚占37％。
b挥发油的高效液相色谱检测法。经药典法提取制得的挥发油用少量的乙酸乙酯溶解后，加入甲醇，注入高效液相色谱议中，得到高效液相指纹图谱，并制定质量标准。
c马兜铃酸的检测方法。马兜铃酸是引起肾损伤的物质之一，必须对马兜铃酸进行研究，采用甲醇-水(3∶1)超声提取30分钟的溶液作为供试液，注入高效液相色谱仪，建立高效液相色谱马兜铃酸的检测方法。
本发明的优点是提供了规范化种植的无毒害中药材辽细辛的检测方法。对于确定规范化种植的无毒害中药材辽细辛的质量提供了保证。制定了切实可行的马兜铃酸的检测方法。


图1为细辛的气相指纹图谱。
图2为细辛的高效液相指纹图谱。
图3为细辛叶中马兜铃酸检查图。
图4为细辛茎中马兜铃酸检查图。
图5为细辛根中马兜铃酸检查图。
图6为马兜铃酸的限量检查图。
图7为马兜铃酸的限量检查10倍量图。
具体实施例方式实施例1挥发油的气相检测法。
取60℃干燥的细辛100g，置1000ml烧瓶中，加水600ml，浸泡过夜，按《中国药典》2000年版一部，提取8小时挥发油收集得到的挥发油置10ml量瓶，加环己烷溶解并稀释至刻度，取0.4μl注入气相-质谱联用色谱仪中，色谱条件为美国Finigan Trace GC-MS仪，DB-1MS(0.25×0.25×30)程序升温初始温度为60℃，保持3分钟后10℃/min的速率升至230℃，保持20min，气化室温度260℃，分流比10∶1，载气He，流速1ml/min，进样量0.4μl，电子轰击(EI)离子流，高子能量70ev，离子流温度230℃，质量扫描范围33u-500u，扫描速率1000amu/s，记录40分钟的色谱图，以10批细辛为研究对象，得挥发油的气相指纹图谱，并制定质量标准。其中1.侧柏烯；2.α-蒎烯；3.莰烯；4.α-松油烯；5.β-蒎烯；6.香叶烯；7.α-水芹烯；8.3-蒈烯；9.对-聚伞花系；10.柠烯；11.γ-松油烯；12.α-异松油烯；13.优葛缕酮；14.龙脑；15.爱革脑；16.3，5-二甲氧基甲苯；17.黄樟醚；18.甲基丁香酚；19.三甲氧基甲苯；20.β-古芸烯；21.α-愈创木烯；22.β-愈创木烯；23.肉豆蔻醚；24.δ毕澄茄烯；25.asarone；26.反式-异榄香脂素；27.异-异榄香脂素。
其中3-蒈烯具有局部刺激作用，优葛缕酮具有镇咳平喘作用，甲基丁香酚具有解痉降温作用。
实施例2挥发油的高效液相色谱检测法。
将提取的挥发油精密吸取0.2ml置10ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，取10μl注入高效液相色谱仪中，色谱条件为日本岛津公司LC-10AT色谱仪，岛津SPD-10A型紫外-可见检测器。大连依利特有限公司Kromasil C18(200mm×4.6mm，5μm)色谱柱，乙睛-水(40-60)为流动相，流速0.8ml/min，波长250nm，记录50分钟色谱图，以10批细辛为研究对象，得挥发油的高效液相指纹图谱并制定质量标准。
实施例3
马兜铃酸的检测方法。
供试品溶液的制备 取细辛药材根、茎、叶粉末各1g，加甲醇-水(3∶1)溶液25ml，浸泡15min，超声处理20min，滤过。滤液再以0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
对照品溶液的制备 马兜铃酸对照品用甲醇-水(3∶1)溶液稀释成0.45μg/ml的溶液，摇匀，即得对照品溶液。
取上述供试品溶液及对照品溶液各10μl，注入HPLC。
日本岛津公司LC-10AT色谱仪，岛津SPD-10A型紫外-可见检测器，大连依利特有限公司Kromasil C18(200mm×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相0.05mol/L磷酸二氢钠(含磷酸1ml/L)-乙腈(60∶40)，流速1ml/min，检测波长400nm，柱温室温，进样量10μl，马兜铃酸的理论塔板数不低4900。马兜铃酸对照品线性范围及最低检测限试验 马兜铃酸对照品用甲醇-水(3∶1)溶解并溶液稀释成0.09mg/ml的溶液，摇匀，再稀释，摇匀，精确吸取10μl，注入HPLC，测得线性范围45-900μg。信噪比为3∶1时，马兜铃酸对照品最低检测浓度为0.45μg/ml，最低检出量为4.5ng。
上述来源的细辛的高效液相色谱图中在马兜铃酸标准品峰相应的位置上均无色谱峰，表明细辛中无马兜铃酸。
权利要求
1.无毒害中药材辽细辛的检测方法，其特征在于a挥发油的气相检测法；采用《中国药典》2000年版一部挥发油提取法提取挥发油，经环已烷溶解，注入气相色谱-质谱联用色谱议中，绘制指纹图谱，并制定质量标准，经计算机分析结果，得到甲基丁香酚、黄樟醚、肉豆蔻醚等28个峰，其中主要成分甲基丁香酚占37％；b挥发油的高效液相色谱检测法经药典法提取制得的挥发油用少量的乙酸乙酯溶解后，加入甲醇，注入高效液相色谱议中，得到高效液相指纹图谱；c马兜铃酸的检测方法采用甲醇-水(3∶1)超声提取30分钟的溶液作为供试液，注入高效液相色谱仪，建立高效液相色谱马兜铃酸的检测方法。
全文摘要
本发明公开了一种无毒害中药材辽细辛的检测方法，它具有快速、简便、准确的特点。采用《中国药典》2000年版一部挥发油提取法提取挥发油，经环己烷溶解，注入气相色谱－质谱联用色谱议中，绘制指纹图谱，经计算机分析结果，得到甲基丁香酚、黄樟醚、肉豆蔻醚等28个峰，其中主要成分甲基丁香酚占37％；经药典法提取制得的挥发油用少量的乙酸乙酯溶解后，加入甲醇，注入高效液相色谱议中，得到高效液相指纹图谱；采用甲醇－水(3∶1)超声提取30分钟的溶液作为供试液，注入高效液相色谱仪，建立高效液相色谱马兜铃酸的检测方法。本发明对于确定规范化种植的无毒害中药材辽细辛的质量提供了保证。制定了切实可行的马兜铃酸的检测方法。
文档编号G01N30/88GK1570625SQ20041002047
公开日2005年1月26日 申请日期2004年4月27日 优先权日2004年4月27日
发明者孙启时, 贾凌云 申请人:沈阳药科大学