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专利名称：液相色谱反相分离-电化学检测分析系统的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种化学仪器分析的使用系统，特别是涉及自制聚合物反相柱直接分离，电化学检测氨基糖苷类抗生素(妥布霉素)的液相色谱-电化学分析系统。
背景技术：
氨基糖苷类抗生素(Aminoglycosides)是由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而成的苷类抗生素，主要通过抑制细菌蛋白质的合成，用于敏感需氧革兰阴性和阳性杆菌所致的全身感染。妥布霉素(tobramycin)为氨基糖苷类广谱抗生素中的一种，对革兰阳性菌和阴性菌均具有良好的抗菌作用。由于缺乏紫外吸收，妥布霉素的测定多采用微生物法，旋光法，分光光度法，HPLC柱前柱后衍生，紫外或荧光检测法，HPLC-蒸发光散射检测法，HPLC柱后加碱电化学检测法，糖柱分离电化学检测法。微生物法、旋光度法、和分光光度法均不能排除制剂中杂质的干扰，操作繁锁、费时，而且反应过程产生的副产物也可干扰测定。衍生法复杂，条件较难控制，容易因衍生剂等各种因素造成系统不稳定。蒸发光散射法需易挥发的流动相，且检测灵敏度低。糖柱分离电化学检测法因妥布霉素保留弱，需高交换容量糖柱和低浓度淋洗液，条件较难控制，且低浓度淋洗液造成检测灵敏度低。一般反相柱为硅胶基质，氨基糖苷类抗生素的液相分离多为在酸性条件下采用离子对分离，而脉冲安培电化学检测需在碱性条件下工作，因此必须在柱后加碱。本发明采用自制聚合物反相柱，直接在碱性条件下分离检测妥布霉素，不需柱后加碱。迄今为止，未见以聚合物反相柱在碱性条件下直接分离，电化学检测氨基糖苷类抗生素的报道。

发明内容
本发明提供一种液相分离-电化学检测分析系统，利用聚合物反相柱能在碱性条件下使用与脉冲安培检测法需在碱性条件下工作相匹配，而碱性条件下妥布霉素在聚合物反相柱中有所保留，因此直接采用氢氧化钠溶液加少量乙腈作为淋洗液，自制的聚苯乙烯-二乙烯基苯基质的聚合物反相柱作为固定相，脉冲安培法检测妥布霉素。本发明的具体技术方案如下
本发明是一种液相色谱反相分离-电化学检测分析系统，该系统利用聚合物反相柱能在碱性条件下使用与脉冲安培检测法需在碱性条件下工作相匹配，而碱性条件下妥布霉素在聚合物反相柱中有所保留，因此直接采用氢氧化钠溶液加少量乙腈作为淋洗液，自制的聚苯乙烯-二乙烯基苯基质的聚合物反相柱作为固定相，脉冲安培法检测妥布霉素。结构简单，无需采用繁琐的衍生方法，用电化学检测无需额外的柱后加碱装置，条件易于控制， 操作简便，并能在短时间内完成测定，检测灵敏度高。本发明采用自制的苯乙烯-二乙烯基苯微球填充的聚合物反相柱作为固定相，分析成本大大降低。
本发明可望用于其他氨基糖苷类抗生素的检测。本发明具有如下优点和效果
本发明利用自制的聚合物反相柱，分析成本大大降低，在碱性条件下直接分离妥布霉素，脉冲安培法检测，结构简单，无需采用繁琐的衍生方法，电化学检测无需额外的柱后加碱装置，条件易于控制，操作简便，并能在短时间内完成测定，检测灵敏度高。


图1为分析方法的装置图； 图2为分析方法的标准样品(妥布霉素)信号峰； 图3为分析方法的实际样品(妥布霉素滴眼液)信号峰； 图4为分析方法的实际样品(妥布霉素注射液)信号峰； 图1中标记为
1-泵；2-六通阀；3-被分析样品；4-定量环；5-分离柱；6-脉冲安培检测器；7-废液
缸；
图2中标记为
8-妥布霉素a; 图3中标记为
9-妥布霉素b； 图4中标记为
10-妥布霉素C。
具体实施方案下面结合说明书附图对本发明作进一步具体的说明
本发明利用聚合物反相柱能在碱性条件下使用与脉冲安培检测法需在碱性条件下工作相匹配，而妥布霉素在聚合物反相柱中有保留。图1为分析方法的装置图，如图所示，流动相自离子色谱泵1输送，被分析样品3由六通阀2上的定量环4进样，经分离柱5分离后的组分进入脉冲安培检测器6，尾液排至废液缸7，信号由计算机和工作站记录处理。图2 为利用上述方法分析妥布霉素标准溶液的色谱图，8号色谱峰为妥布霉素a (10 ppm);图3 为滴眼液样品的色谱图，9号色谱峰为妥布霉素b ；图4为注射液样品的色谱图，10号色谱峰为妥布霉素C。以美国戴安公司(Dionex)的离子色谱仪Dionex ICS-2000，自制的苯乙烯-二乙烯苯微球(粒径5 μ m)填充的250X4mm的液相柱为固定相，以50 mmol. L^1NaOH(由50%Na0H 配制)+0. 5% (ν/ν)乙腈为流动相，流动相流速为1. 0 mL/min,进样量为25 μ , ED40电化学检测器脉冲安培检测。检测电位设置为=E1, E2, E3和E4分别为0. 05 V，-2. 00 V，0. 60 V和-1. 00 V，相应的时间间隔为0-0. 40，0. 41-0. 42，0. 43和0. 44-0. 50 s,积分区间为 0. 20-0. 40 S。在该实验条件下，用本发明的液相色谱-电化学检测分析系统，可以对妥布霉素滴眼液和注射液进行分析。
权利要求
1.一种液相色谱反相分离-电化学检测分析系统，其特征在于利用聚合物反相柱能在碱性条件下使用与脉冲安培检测法需在碱性条件下工作相匹配，碱性条件下妥布霉素在聚合物反相柱中有所保留，直接采用氢氧化钠溶液加少量乙腈作为淋洗液，自制的聚苯乙烯-二乙烯基苯基质的聚合物反相柱作为固定相，脉冲安培法检测妥布霉素。
2.根据权利要求1所述的液相色谱反相分离-电化学检测分析系统，其特征在于，该系统可望用于其他氨基糖苷类抗生素的检测。
全文摘要
本发明涉及一种化学仪器分析的使用系统，特别是涉及自制聚合物反相柱直接分离，电化学检测氨基糖苷类抗生素的液相色谱-电化学分析系统。其利用聚合物反相柱能在碱性条件下使用与脉冲安培检测法需在碱性条件下工作相匹配，碱性条件下妥布霉素在聚合物反相柱中有所保留，直接采用氢氧化钠溶液加少量乙腈作为淋洗液，自制的聚苯乙烯-二乙烯基苯基质的聚合物反相柱作为固定相，脉冲安培法检测妥布霉素。本发明利用自制的聚合物反相柱，分析成本大大降低，在碱性条件下直接分离妥布霉素，脉冲安培法检测，结构简单，无需采用繁琐的衍生方法，电化学检测无需额外的柱后加碱装置，条件易于控制，操作简便，并能在短时间内完成测定，检测灵敏度高。
文档编号G01N30/02GK102331464SQ20111017027
公开日2012年1月25日 申请日期2011年11月15日 优先权日2011年11月15日
发明者朱作艺, 朱岩 申请人:浙江大学