专利名称：一种化妆品中多种紫外吸收剂残留量的高效液相色谱检测方法
技术领域：
本发明涉及分析化学、食品安全领域，具体地说，是一种化妆品中紫外吸收剂残留量的检测方法。
背景技术：
近年来，紫外线辐射量随着臭氧层的破坏不断增加，给人类带来的影响已被世界范围所认识。目前具有安全、高效吸收紫外线辐射的紫外线吸收剂为保护人体免受过量的紫外线辐射已广泛应用于化妆品、护发品、织物处理及洗涤剂中。紫外吸收剂(UV Absorbent)的作用机理是基于其分子内氢键，由苯环上的羟基氢和相邻的羰基氧之间，形成的分子内氢键构成了 一个螯合环。当吸收紫外光后，分子发生热振动，氢键破裂螯合环打开，形成离子型化合物，这个化合物处于不稳定的高能状态，要恢复到原来的低能稳定状态，把多余的能量以其他能量释放出来，螯合环又闭环，这样周而复始的吸收紫外光起保护作用。其次，因羰基会被激发，发生互变异构现象生成烯醇式结构也可消耗一部分能量。从而有效地防止紫外线对皮肤的晒黑和晒伤作用[7_13]。紫外吸收剂虽能有效阻止紫外线对人皮肤的伤害，但是作为一种直接涂抹于人体皮肤的化学产品，为皮肤组织所吸收后，由人体代谢，过量的添加使用，势必增加人体代谢负担，影响人体健康。紫外吸收剂要想达到理想的防晒效果，防晒品中的化学成份就必须进入皮肤角质，经皮肤吸收后，跟紫外线产生交互作用，使其转变为无害的能量。因为是在皮肤上发生化学反应，所以对皮肤有一定的刺激。尤其容易产生使肌肤粗糙、刺激眼部、引起炎症等问题。而且紫外线吸收剂本身就是一种光敏物质，使用不当还会对皮肤产生刺激，弓丨起光敏性反应等。紫外吸收剂因其可以有效保护人体免受过量的紫外线辐射而广泛应用于化妆品中。但是化妆品中防晒剂添加过量会对人体产生一定的�：Γ缫资辜》舸植�、刺激眼部和皮肤，引起光敏性反应等，目前世界各国对防晒剂的添加量做出了不同的限制，我国2007版《化妆品卫生规范》对防晒剂种类和用量作了详细限制。目前，防晒化妆品中紫外吸收剂的常用检测方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱法和液相色谱-质谱法。高效液相色谱法因具有前处理比较简便，灵敏度也比较高等特点，应用较多，但大多数仅能检测几种紫外吸收剂，缺少同时检测多种紫外吸收剂的方法。而使用液相色谱-质谱法检测防晒化妆品中紫外吸收剂却少有报道。本发明旨在利用高效液相色谱检测技术，建立一种可同时检测2-苯基苯并咪唑-5-磺酸、对氨基苯甲酸、二苯酮-3、4_甲氧基肉桂酸异戊酯、4-甲基苄亚基樟脑、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯、奥克立林、4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯、4-甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯、胡莫柳酯(混合异构体)、水杨酸-2-乙基己酯、丁基甲氧基二苯酸甲烷等12种紫外吸收剂残留量的检测方法。
发明内容
本发明的目的是克服现有不足问题，提供一种高效液相色谱法检测化妆品中多种紫外吸收剂残留量的方法，可方便、准确、高效地同时检测化妆品中2-苯基苯并咪唑-5-磺酸、对氨基苯甲酸、二苯酮-3、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、4-甲基苄亚基樟脑、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯、奥克立林、4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯、4-甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯、胡莫柳酯(混合异构体)、水杨酸-2-乙基己酯、丁基甲氧基二苯酸甲烷等12种紫外吸收剂残留量。本发明为实现上述目的所采用的技术方案是一种化妆品中多种紫外吸收剂残留量的检测方法，包括以下步骤
(I)样品的提取
称取O. 4 g (精确至O. Olg)化妆品样品于50 mL塑料离心管中，加入20 mL样品提取液，润旋混合2 min后,超声振荡提取20 min, 8000r/min离心10 min,上清液待净化。(2)净化
试液依次过O. 45Mm,0. 20 Mm微孔滤膜后，待上机测定。(3)高效液相色谱仪测定
根据试样中紫外吸收剂的含量情况，选取响应值相近的标准工作溶液一起进行效液相色谱测定，对标准工作溶液和样液等体积参差进样，测定标准工作溶液和样液中紫外吸收剂的响应值均应在仪器检测的线性范围内。根据峰保留时间定性，根据峰面积外标法定量。作为优�。诓街�(I)中所述样品提取液为分别量取800 mL甲醇、IOOmL高纯水和100 mL乙醇，混合均勻。作为优�。诓街�3中所述液相色谱分析条件为
a)色谱柱C18色谱柱；
b)流动相V(甲醇)V (水)=85:15，等度洗脱；
c)流速1.O mL/min ；
d)进样量5μ ；
e)紫外检测波长310nm ；
f)柱温35°C
作为优�。龇聪郈18柱为Symmetry shield C18色谱柱(250 mm X 4. 6 mm1.d.,5
Mm)。作为优选，在步骤(3)中所述标准工作溶液的配置方法为配置单个标准储备液及混合标准储备液时，用样品溶解液溶解。样品溶解液配置方法为分别量取850 mL甲醇和150 mL高纯水,混合均勻。进一步地,所述化妆品选自防晒霜、防晒乳液。进一步地，所述所述紫外吸收剂包括下述紫外吸收剂中至少一种2_苯基苯并咪唑-5-磺酸、对氨基苯甲酸、二苯酮-3、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、4-甲基苄亚基樟脑、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯、奥克立林、4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯、4-甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯、胡莫柳酯(混合异 构体)、水杨酸-2-乙基己酯、丁基甲氧基二苯酸甲烷。由于采用上述技术方案，本发明的有益效果在于1、建立了化妆品(防晒霜、防晒乳液)中2-苯基苯并咪唑-5-磺酸、对氨基苯甲酸、二苯酮-3、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、4-甲基苄亚基樟脑、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯、奥克立林、4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯、4-甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯、胡莫柳酯(混合异构体)、水杨酸-2-乙基己酯、丁基甲氧基二苯酸甲烷等紫外吸收剂残留量的高效液相色谱检测方法。实现了对12种紫外吸收剂的同时检测。2、选择甲醇-乙醇-水作为提取剂(80:10:10)，超声波振荡提取，高速离心，悬蒸浓缩方式进行提取和分离，提取效率高，提取液中杂质溶出少。3、建立的对防晒化妆品中12种紫外吸收剂同时检测的高效液相色谱分离条件。选用 Symmetry shield C18 (250 mm X 4. 6 mm1.d.,5 Mm)色谱柱，以甲醇-水溶液(体积比为85:15)为流动相，紫外检测波长为310 nm，在18分钟内，成功地将12种紫外吸收剂进行分离。4、建立的高效液相色谱方法，12种紫外吸收剂在4 2000 μ g/ml浓度范围内含量(X)与峰面积(Y)有良好的线性关系。方法的检测低限分别为2-苯基苯并咪唑-5-磺酸400mg/kg, 丁基甲氧基二苯酸甲烧250 mg/kg, 4-甲基节亚基樟脑200 mg/kg, 二苯酮-3、4_甲氧基肉桂酸异戊酯、二 乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯、奥克立林、PABA乙基己酯、甲氧基肉桂酸乙基己酯、水杨酸乙基己酯和胡莫柳酯均为500 mg/kg。对膏状基质,平均回收率(％)为87. 36 97. 44，变异系数(％)为3. 30 7. 86 ;对乳状基质，平均回收率(％)为87. 68 97. 29，变异系数(％) 3. 98 7. 68。5、本发明可应用于化妆品中多种紫外吸收剂残留量的检测中，具有简单、快速、准确、高效等优点，可同时检测12种紫外吸收剂，检测底限、回收率、精密度等技术指标满足国内外对防晒化妆品中紫外吸收剂检测的有关要求，适合于防晒化妆品中紫外吸收剂的检测和监测。对促进我国化妆品的进出口贸易，确保化妆品安全，保障人类身体健康都具有十分重要的意义。
图1为12种紫外吸收剂标准溶液的高效液相色谱 图2是防晒霜空白样品高效液相色谱 图3是防晒霜空白样品添加紫外吸收剂标准溶液(检测低限水平)的高效液相色谱图； 图4是防晒乳液空白样品高效液相色谱 图5是防晒乳液空白样品添加紫外吸收剂标准溶液(检测低限水平)的高效液相色谱图。图中1、2_苯基苯并咪唑-5-磺酸；2、对氨基苯甲酸；3、二苯酮-3 ;4、4_甲氧基肉桂酸异戊酯；5、4_甲基苄亚基樟脑；6、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯；7、奥克立林；8、4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯；9、4_甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯；10、胡莫柳酯(混合异构体)；11、水杨酸-2-乙基己酯；12、丁基甲氧基二苯酸甲烷。
具体实施例方式 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明并不局限于具体实施例。实施例1膏状样品湎霜)中多种紫外吸收剂残留量的检测方法1、样品的提取
称取O. 4 g (精确至O. Olg)化妆品样品于50 mL塑料离心管中，加入20 mL样品提取液，润旋混合2 min后,超声振荡提取20 min, 8000r/min离心10 min,上清液待净化。
2、净化
试液依次过O. 45Mm,0. 20 Mm微孔滤膜后，待上机测定。3、高效液相色谱仪测定
根据试样中紫外吸收剂的含量情况，选取响应值相近的标准工作溶液一起进行效液相
色谱测定，对标准工作溶液和样液等体积参差进样，测定标准工作溶液和样液中紫外吸收
剂的响应值均应在仪器检测的线性范围内。根据峰保留时间定性，根据峰面积外标法定量。液相色谱分析条件
g)色谱柱Symmetryshield C18 色谱柱(250 mm X 4. 6 mm1.d.,5 Mm)；
h)流动相V(甲醇)V (水)=85:15，等度洗脱；
i)流速1.O mL/min ；
j)进样量5 PL ;
k)紫外检测波长310 nm ；
I)柱温35°Co4、线性关系
将标准储备液逐级稀释，制备六个不同浓度的系列混合标准工作液，见表I。表I系列标准工作液
权利要求
1.一种化妆品中多种紫外吸收剂残留量的高效液相色谱检测方法，其特征在于该方法包括以下的步骤 (1)样品的提取 称取O. 4 g化妆品样品于50 mL塑料尚心管中，加入20 mL样品提取液,润旋混合2 min后，超声振荡提取20 min,8000r/min离心10 min,上清液待净化； (2)净化 试液依次过O. 45Mm、0. 20 Mm微孔滤膜后，待上机测定； (3)高效液相色谱仪测定 根据试样中紫外吸收剂的含量情况，选取响应值相近的标准工作溶液一起进行效液相色谱测定，对标准工作溶液和样液等体积参差进样，测定标准工作溶液和样液中紫外吸收剂的响应值均应在仪器检测的线性范围内，根据峰保留时间定性，根据峰面积外标法定量。
2.根据权利要求1所述的化妆品中多种紫外吸收剂残留量的检测方法，其特征在于步骤(I)中所述样品提取液为分别量取800 mL甲醇、IOOmL高纯水和100 mL乙醇，混合均匀。
3.根据权利要求1所述的化妆品中多种紫外吸收剂残留量的检测方法，其特征在于步骤(3)中所述液相色谱分析条件为 色谱柱C18色谱柱； 流动相V (甲醇)V (水)=85:15，等度洗脱；流速1. O mL/min ； 进样量5 μ ； 紫外检测波长:310 nm ； 柱温35°C。
4.根据权利要求3所述的化妆品中多种紫外吸收剂残留量的检测方法，其特征在于所述 C18 柱为 Symmetry shield C18 色谱柱(250 mmX4.6 mm1.d.,5 Mm)。
5.根据权利要求1所述的化妆品中多种紫外吸收剂残留量的检测方法，其特征在于步骤(3)中标准工作溶液的配置方法为配置单个标准储备液及混合标准储备液时，用样品溶解液溶解，样品溶解液配置方法为分别量取850 mL甲醇和150 mL高纯水，混合均匀。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化妆品中多种紫外吸收剂残留量的检测方法，其特征在于所述化妆品选自防晒霜、防晒乳液至少一种。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化妆品中多种紫外吸收剂残留量的检测方法，其特征在于所述紫外吸收剂包括中的至少一种2_苯基苯并咪唑-5-磺酸、对氨基苯甲酸、二苯酮-3、4-甲氧基肉桂酸异戊酯、4-甲基苄亚基樟脑、二乙氨基羟苯甲酰基苯甲酸己酯、奥克立林、4-二甲氨基苯甲酸-2-乙基己酯、4-甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯、胡莫柳酯(混合异构体)、水杨酸-2-乙基己酯、丁基甲氧基二苯酸甲烷。
全文摘要
本发明涉及分析化学、食品安全领域。一种化妆品中多种紫外吸收剂残留量的高效液相色谱检测方法，称取0.4g化妆品样品于50mL塑料离心管中，加入20mL样品提取液，涡旋混合2min后，超声振荡提取20min，8000r/min离心10min，上清液待净化；试液依次过0.45μm、0.20μm微孔滤膜后，采用高效液相色谱仪进行定性和定量测定。本发明具有简单、快速、准确、高效等优点，可同时检测12种紫外吸收剂，检测底限、回收率、精密度等技术指标满足国内外对防晒化妆品中紫外吸收剂检测的有关要求，适合于防晒化妆品中紫外吸收剂的检测和监测。对促进我国化妆品的进出口贸易，确保化妆品安全，保障人类身体健康都具有十分重要的意义。
文档编号G01N30/08GK103063763SQ20121056072
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月21日 优先权日2012年12月21日
发明者林维宣, 孙兴权, 马杰, 谢琰, 于灵 申请人:林维宣
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