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专利名称：血液分析仪用溶血剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及在临床医学检验领域中，用于血液分析仪测定血液中的白细胞总数及白细胞分类为淋巴细胞和其他白细胞2个亚类，并能用于测定血红蛋白浓度的试剂。
测定血液中的白细胞数及白细胞分类以及血红蛋白的浓度，在临床诊断和治疗过程中是极为重要的，根据白细胞数的变化及血红蛋白浓度的高低，能帮助临床诊断疾病和观察疗效，指导临床用药。
迄今为止，临床检验血液常规检查方法中，白细胞数显微镜视算法(计算板计数法)，已逐步被血液分析仪法所代替。白细胞显微镜视算法，是一种传统计数方式，此法虽简便，但影响因素较多，速度慢、费时、误差大、重复性差，并存在一定的人为因素。
关于血红蛋白浓度测定，根据国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的HiCN法，是将血红蛋白转化成氰化高铁血红蛋白后用分光度计在540nm处，测定其消光系数，然后据此求出血红蛋白的浓度。
另外，在应用电阻法血液分析仪进行白细胞2分类时，识别器根据白细胞分布图描述细胞大小的分布情况进行分类设置，可分为①淋巴细胞区(小型细胞)②大型细胞(中性细胞)和中间型细胞区。
迄今为止，有关血液分析仪使用白细胞2分类的溶血剂，虽然方法在文献上发表了许多，但这些方法经试用不理想，多数以十六烷基三甲溴化铵为主要溶血成分，浓度较高，在2～20℃时各组分配伍中解决不了结晶问题，且白细胞不分类机率太高，少数以非离子表面活性剂作为主要溶血成份，但溶血缓慢，易产生溶血不完全、堵孔现象和白细胞不计数。
在白细胞2分类的溶血剂配方中，如果采用十六烷基三甲基溴化铵作为主要成分，虽然溶血能力强，但室温下易析结晶，不易长期保存，原因是十六烷基三甲溴化铵的溶解度较低，单独将其溶解水溶液的浓度达到10g/L时，室温下即可析出结晶，在配方中一般用量较大(35～68g/L)，虽然加入了醇类作为增溶剂，但增溶效果不甚理想，醇类低浓度时，增溶效果很小，仍能析出结晶；高浓度时，容易挥发，使用中极不稳定，时间久也会析结晶。如果采用较温和非离子表面活性剂如壬基酚聚氧乙烯醚或TritonX-100作为主要成分时，虽然量较大(35～100ml/L)，但因其性能温和，溶血速度慢，易出现溶血不完全现象影响白细胞计数及分类。
另外，本发明中阳离子表面活性剂选用十二烷基三甲溴化铵和十六烷基三甲基溴化铵二种，非离子表面活性剂可选用壬基酚聚氧乙烯或聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX-100或op-10)。
本发明采用溶解度高的十二烷基三甲基溴化铵与十六烷基三甲基溴化铵配伍，作为溶血剂的主要溶血成分，完全克服了十六烷基三甲基溴化铵易析结晶的现象，又能保证溶血效果，且在2～30℃存放一年稳定，无结晶析出，这是本发明的关键和独到之处。
另外，本发明采用的原理是先用阳离子表面活性剂和非离子表面活性剂将红细胞溶解，而将白细胞原样保留下来，再使血红蛋白与氰化物反应，将其转化为氰化高铁血红蛋白，然后用电阻法的血液分析仪来测定白细胞数和血红蛋白浓度。
因此，本发明的目的是提供能对白细胞数目进行计算又能将白细胞分类为淋巴细胞和其他白细胞2个亚类，并能正确地求得血红蛋白浓度的试剂，且该试剂为无色透明液体，长期稳定，2～30℃存放无结晶析出，并且还要保证试剂配制简便，成本低廉，经济实用，质量可靠。
为了解决上述课题，本发明的血液分析仪用溶血剂由下列物质组成十二烷基三甲基溴化铵40～120g/L，十六烷基三甲基溴化铵27～60g/L，壬基酚聚氧乙烯醚(或TritonX-100)15～60ml/L，氰化钾2.1～5.6g/L。
将血液标本用稀释液稀释后，加入本发明的血液分析仪用溶血剂后，红细胞迅速被溶解，白细胞膜收缩，但不会收缩到极限附近，其中，中性细胞(大细胞群)和中间细胞群中细胞内核大或颗粒多收缩迟缓，淋巴细胞(小细胞群)中细胞内核小、颗粒少则迅速收缩。将所获得的白细胞悬浮液引入血液分析仪的测量部分，通过检测由测量部分发出的电信号，就可以求出白细胞总数及白细胞2分类，并通过测定这种白细胞悬浮液的吸光度，可求出血红蛋白的浓度。必要的表面活性剂的浓度是十二烷基三甲基溴化铵40～120g/L，十六烷基三甲基溴化铵27～60g/L，壬基酚聚氧乙烯醚(或TritonX-100)15～60ml/L，如果不在此范围之内，则会出现浓度过低，溶血不良，红细胞溶解不完全，易造成机器堵孔，白细胞不计数，或出现浓度过高，溶血亢进，大的白细胞收缩迅速，不能将白细胞分为2个亚类，因此，表面活性剂的浓度应控制在上述范围之内。
本发明的实施例如下实施例(试剂组成)十二烷基三甲基溴化铵 110g/L十六烷基三甲基溴化铵38g/L壬基酚聚氧乙烯醚 20ml/L氰化钾 3.5g/L去离子水 1L
将上述试剂配制好后，取20ul血液样品，用10ml稀释液释后，加入100ul上述组成的溶血剂混匀，30秒后用血液分析仪进行测定，这样可测定出白细胞总数及白细胞分类的2个亚类及血红蛋白浓度。
按照本发明，可以使红细胞迅速地溶血，大细胞群和中间细胞收缩迟缓，而小细胞群的淋巴细胞则收缩迅速，而且不会将白细胞破坏到裸核化不能进行白细胞形态分类的程度，这是本发明的关键之处。同时将血红蛋转化为氰化高铁血蛋白后，即可测出血红蛋白的浓度。
本发明的溶血剂，可应用于F-800、F-820型(日本东亚医用电子株式会社生产)血液分析仪。
权利要求
1.一种血液分析仪用溶血剂，它是一种可以测定血液中的白细胞总数及白细胞分类为淋巴细胞和其他白细胞2个亚类，并能用于测定血红蛋白浓度的试剂。
2.它由下列物质组成十二烷基三甲基溴化铵40～120g/L，十六烷基三甲基溴化铵27～60g/L，壬基酚聚氧乙烯醚15～60ml/L，氰化钾2.1～5.6g/L。
全文摘要
本发明是一种应用于血液分析仪测定血液中白细胞总数及白细胞2分类以及血红蛋白浓度的试剂,可将血液中的白细胞分类为淋巴细胞和其他白细胞2个亚类。它由十二烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基溴化铵、壬基酚聚氧乙烯醚、氰化物等组成。
文档编号G01N33/50GK1254094SQ9812234
公开日2000年5月24日 申请日期1998年11月12日 优先权日1998年11月12日
发明者王正连 申请人:王正连