专利名称：梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种梅毒特异性IgG抗体检测试剂，尤其是涉及一种采用胶体金免疫 层析技术(immunochromatography)进行的梅毒特异性IgG抗体快速检测试剂条及其制备方法。
背景技术：
梅毒(Syphilis)是一种由梅毒螺旋体(Tr印onema pallidum, TP)引起的性传播 性疾�。洳≡迨敲范韭菪澹袈菪蹇�。梅毒螺旋体主要通过性接触、输血、创口或 者胎盘等途径传播。梅毒螺旋体从感染区附近的淋巴结进入血液，播散全身，使机体几乎 所有的组织及器官受累，临床表现为全身性，可分为不同临床阶段，包括一期、二期、三期和 潜伏期。世界卫生组织(WHO)曾乐观地预言“由于有高敏度检测方法和高效的治疗方案， 梅毒是一种能够通过公共卫生措施得到成功控制的性传播性疾病”。遗憾的是，至今梅毒 依然是世界范围的公共卫生问题，缺乏有效的行政控制措施，每年全球大约有1200万的患 #，胃中 60 力■^女gii#。 ( :He￡ilth Protection Agency Centre for Infections. International Encyclopediaof Public Health-Syphi1 is[M] London, UK :Health Protection Agency Centre，2008，289-297.)事实上，梅毒的感染现状可能要比想象中的 更让人悲观。调查发现，梅毒感染者已经较广泛地存在于普通人群中。梅毒螺旋体尚不能进行体外培养，梅毒诊断与流行病学调查主要依赖于血清学试 验，包括特异性抗体和反应素检测两大类型。梅毒特异性抗体IgM(TP-IgM)和IgG(TP-IgG) 抗体分别于2周和4周后产生，即使患者经过足够治疗，其仍能长期存在，甚至终身不消失 (参见:Luis J F, Felipe U S, Santa G C, et al. Evaluation of a rapid strip and a particle agglutinationtests for syphilis diagnosis[J]. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease，2007，59 :123-126)；而另一种抗体物质反应素产生较晚，一般在 受感染后5 7周产生(参见林月圆.TPPA和TRUST在梅毒诊断中的价值与临床相关问题 [J].放射免疫学杂志，2009，22 (3) :295-297)，而且晚期梅毒、梅毒治疗后期以及潜伏梅毒 可能阴性。因此梅毒特异性抗体的阳性率、敏感性显著高于反应素。TP-IgM是梅毒感染后， 机体最先出现的特异性抗体。只要有活的梅毒螺旋体存在，其TP-IgM将会维持在一定的水 平。Martina H等(参见Martina H, Daan ff N,Mart M, et al. Comparison of a Treponema pallidum IgM immunoblot with a 19S fluorescenttreponemal antibody absorption test for the diagnosis of congenital syphilis[J]. DiagnosticMicrobiology and Infectious Disease, 2007, 59 :61_66.)认为TP_IgM是梅毒早期感染并活动的一项血清 学标志，李步荣等(参见李步荣，贺军涛，张毅，等.梅毒螺旋体IgM抗体检测的临床意义 [J].第四军医大学学报，2007，28 (16) 1495-1497)认为TP-IgM与TP-DNA —样，代表着梅 毒传染性指标。在排除近期抗梅毒治疗的前提下，TP-IgM若不转阴，提示体内可能残存梅毒螺旋体或治疗不彻底。TP-IgM阴转者随访时再转阳性，表明再次感染梅毒(参见RaWStr0n SA, Mehta S, Bromberg K, et al.Evaluation of a Treponema pallidum2specific IgMenzyme immunoassay and Treponema pallidum western blot antibody detection in the diagnosisofmaternal and congenital syphilis[J]. Sex Transm Dis,2004,31 (2) 123-126)。尽管TP-IgM阴性不能完全排除传染性，但TP-IgM阳性必定提示该患者具有传 染性。TP-IgG的出现要迟于IgM，能长期存在，甚至终身不消失，因此，TP-IgG是梅毒诊断 和流行病学调查的一项重要指标。早期的血清学方法使用完整梅毒螺旋体作为抗原，研究和诊断用的TP是以TP感 染兔睾丸获得，这种方法花费大、获得的TP量少、不纯(混有宿主蛋白)，与其他病原体存 在交叉反应，因此假阳性也时有发生。随着分子生物学技术的普及及梅毒螺旋体抗原的相 继克�。刈榭乖τ糜诿范臼笛橐丫嚼丛蕉�。目前研究比较多的TP抗原有TPW7、 TPN47、TPN15, TPN44. 5、TPN36、TP0453、TP0684 及 TPr 家族。采用重组 DNA 技术制备的重 组抗原可以克服完整TP抗原的缺点，能快速、经济地制备无限量特异重组TP抗原。梅毒特异性抗体检测是梅毒确证试验，包括TPHA，TPPA，ELISA，FTA-ABS及 Western-blot等，其特异性均较高。然而，面对严峻的防制形式，不但需要特异准确的检测 手段，还需要一种更简便快捷的试剂来筛查，以便为临床和疾病防控提供对策。
发明内容
本发明的目的是提供一种可用于全血、血清、血浆及脑脊液等标本中梅毒特异性 IgG抗体检测的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法。本发明所述梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条设有载体板、加样 垫、胶体金垫、硝酸纤维膜(NC膜)、梅毒特异性IgG抗体检测线、对照线和吸收垫。加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一端 设在胶体金垫的一端上，胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设在 硝酸纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgG抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在 梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体，在对照线处包被 羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体。所述载体板可采用PVC板。所述梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法，包括以下步 骤1)制备梅毒重组抗原TPN17和TPN47采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其 表达，得梅毒重组抗原TPN17和TPN472)硝酸纤维素膜的点样在硝酸纤维素膜IgG检测线上包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体，在对照 线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47 IgG抗体，晾干；3)制备胶体金采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金，取氯金酸lmL加入到100mL去离 子双蒸水中，得到的氯金酸浓度为0. 01%，置于带冷凝装置的烧瓶中加热至沸腾，磁力加热
5搅拌下加入柠檬酸三钠水溶液2. OmL，继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止，冷却后置于 棕色瓶中4°C冰箱保存备用；4)胶体金与TPW7、TPN47的标记胶体金与梅毒特异性抗原TPW7的标记取胶体金10ml，用0. lmol/L NaOH调至 pH5. 4，加 100 u g TPN17,混勻，放置 5min,加入 5 % BSA lml 混勻，4°C、10000r/min 离心 lh, 弃上清，将沉淀用TBS缓冲液溶解至10ml，4°C、10000r/min离心lh，弃上清，沉淀用TBS稀 释至1ml，得胶体金标记的TPN17抗原；胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作，得胶体金标记的TPN47抗原；
将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合后，均勻地涂于玻璃 纤维膜上，烘干，制备成胶体金垫；5)制备免疫层析检测条将加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一 端设在胶体金垫的一端上，胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设 在硝酸纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgG抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上； 在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体，在对照线处包 被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体，用切条机切成条状，得梅毒特异性IgG抗体胶 体金免疫层析检测试剂条。在步骤2)中，所述抗人IgG特异性片段、链单克隆抗体的浓度为1 4mg/mL，羊 抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体由抗TPm7_IgG抗体与抗TPN47_IgG抗体按体积比 1 1混合，其终浓度为1 4mg/mL ；三者点样量为1 P L/cm。在步骤3)中，所述柠檬酸三钠的浓度可为2%。在步骤4)中，所述将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合， 最好胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原以体积比1 (0. 2 5)混合； 所述烘干的温度可为37°C。本发明提供了一种可用于全血、血清、血浆及脑脊液等标本中梅毒特异性IgG抗 体检测的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法，检测所需标本量 极�。恍枰厥庖瞧鳎庋壑苯优卸两峁壹觳饧虮憧焖伲匾煨郧浚槊舳冉细撸既� 可靠，成本较低，应用广泛。
图1为本发明梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条实施例的结构组成 示意图。图2为实验结果模式示意图。在图2中，A为使用前的示意图，B为无效试验(产 品质量问题)，C为阴性结果，D为TP-IgG阳性结果；5为梅毒特异性IgG抗体检测线，7为 对照线。
具体实施例方式以下实施例将结合附图对本发明作进一步的说明。参见图1，本发明所述梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条实施例设有载体板1、加样垫2、胶体金垫3、硝酸纤维膜(NC膜)4、梅毒特异性IgG抗体检测线5、对 照线7和吸收垫8。加样垫2、胶体金垫3、硝酸纤维膜4和吸收垫8依次粘贴在载体板1上 表面，加样垫2的一端设在胶体金垫3的一端上，胶体金垫3的另一端设在硝酸纤维膜4的 一端上，吸收垫8的一端设在硝酸纤维膜4的另一端上，梅毒特异性IgG抗体检测线5和对 照线7依次设在硝酸纤维膜4上；在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片 段、链单克隆抗体，在对照线7处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体。所述载体板1采用PVC板。所述梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法，包括以下步 骤1)制备梅毒重组抗原TPN17和TPN47采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其 表达，得梅毒重组抗原TPN17和TPN47。2)硝酸纤维素膜的点样在硝酸纤维素膜IgG检测线上包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体，在对 照线处(C)包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47 IgG抗体，晾干，所述抗人IgG特异性片 段、链单克隆抗体的浓度为1 4mg/mL，羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体由抗 TPN17-IgG抗体与抗TPN47-IgG抗体按体积比1 1混合，其终浓度为1 4mg/mL ；三者点 样量为1 U L/cm。3)制备胶体金采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金，取1 %氯金酸lmL加入到100mL去离 子双蒸水中，得到的氯金酸浓度为0. 01%，置于带冷凝装置的烧瓶中加热至沸腾，磁力加热 搅拌下加入柠檬酸三钠水溶液2. OmL，继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止，冷却后置于 棕色瓶中4°C冰箱保存备用，所述柠檬酸三钠的浓度可为2%。4)胶体金与TPW7、TPN47的标记胶体金与梅毒特异性抗原TPW7的标记取胶体金10ml，用0. lmol/L NaOH调至 pH5. 4，加 100 u g TPN17,混勻，放置 5min,加入 5 % BSA lml 混勻，4°C、10000r/min 离心 lh, 弃上清，将沉淀用TBS缓冲液溶解至10ml，4°C、10000r/min离心lh，弃上清，沉淀用TBS稀 释至lml。胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作，得胶体金标记的TPN47抗原。将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合后，均勻地涂于玻璃 纤维膜上，烘干，制备成胶体金垫。所述将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47 抗原混合，是胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原以体积比1 (0. 2 5) 混合；所述烘干的温度为37°C。5)制备免疫层析检测条将加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一 端设在胶体金垫的一端上，胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设 在硝酸纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgG抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上； 在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体，在对照线处包 被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体，用切条机切成条状，得梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条。以下给出免疫层析法检测患者的临床标本取待检标本(全血、血清、血浆、脑脊液)5 40 yL，加样于梅毒特异性IgG抗体胶 体金免疫层析检测试剂条样品处，滴加lOOyL生理盐水，静置20min观察结果。只在检测 条对照区有一紫红色条带出现，则判为阴性；在检测区及对照区均有一紫红色条带出现，则 判为阳性；加样检测后，检测区和对照区均不出现紫红色条带，为无效结果(参见图2)。以下给出梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的性能检定1)外观检查白色包被反应膜平整、干净无污染斑点、无裂缝，胶带无开胶，无切 斜现象。2)阳性标本符合率用TP-IgG阳性的不同滴度的阳性参比血清各50份采用梅毒 特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条检定，计算阳性符合率。阳性参比血清的确定 采用FTA-ABS(德国欧蒙公司)法确定的临床标本。3)阴性标本符合率用50份阴性参比血清检定，计算阳性符合率。阴性参比血清 的确定采用TPPA(日本富士株式会社)法确定的临床标本。4)灵敏度检测用卫生部室内质控血清检测，最低检出限度应小于或等于4NCU/ mL，与TPPA(日本富士株式会社)相当。5)批内差异同一批次梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条，用特征 性血清检测，要求阳性血清检测结果显示色带的颜色深浅一致，阴性血清检测的结果阴性。6)批间差异不同批次梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条，用特征 性血清检测，要求阳性血清检测结果显示色带的颜色深浅一致，阴性血清检测的结果阴性。7)干扰试验检测结果不受标本溶血(n = 50)、脂血(n = 50)和黄疸(n = 50) 的干扰。血清(或血浆)来自本申请人临床标本。8)交叉反应采用本梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条，进行系统 性红斑狼疮(n = 30)、类风湿病(n = 30)、免疫性肝炎(n = 30)等自身免疫系统疾病的检 测，未发现交叉反应。自身免疫系统疾病的血清来自本申请人临床确诊患者。9)稳定性检测应用Arrhenius法则，将梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检 测试剂条放置37°C 20天后检测，以上各项指标无显著变化，确保成品在室温干燥条件下保 存，有效期为18个月。本发明的检测在一条梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条上进行，通 过以下两种方式实现梅毒特异性IgG抗体的检测方式一利用胶体金免疫层析技术，在硝酸纤维素膜上IgG检测线和对照线处分 别包被抗人IgG特异性片段、链单克隆抗体和羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47 IgG抗体。 将已纯化的金标记的梅毒重组抗原TPW7和TPN47以一定的比例混合后预包被在玻璃纤维 纸上，干燥处理，制备成胶体金垫，再辅以恰当的加样垫，组合成梅毒特异性IgG抗体胶体 金免疫层析检测试剂条(组装方式参见图1)。检测阳性样本时，样本中梅毒特异性IgG抗 体与胶体金标记的重组抗原TPN17和/或TPN47结合形成免疫复合物。由于层析作用，复 合物沿吸收垫的吸水纸方向向前移动。经过检测线时，①TP-IgG类免疫复合物与预包被的 抗人IgG单克隆抗体结合形成“AU-TPN17 (和/或TPN47)-特异性抗梅毒IgG抗体-抗人 IgG单克隆抗体-固相材料”夹心物而凝聚显色；②游离金标抗原则在对照线处与羊抗梅毒
8抗原TPN17和TPN47抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色。方式二 将方式一的包被抗原、抗体对调在硝酸纤维素膜上IgG检测线和对照线 处分别包被梅毒重组抗原(TPm7/TPN47组合)和羊抗鼠IgG抗体，将金标记的抗人IgG特 异性片段Y链单克隆抗体预包被在玻璃纤维纸上。载体板采用PVC材料，加样垫采用玻璃纤维材料，吸收垫采用吸液纸。以下给出具体实施例。实施例1在梅毒特异性IgG抗体检测线上包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体，在对 照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47抗体，室温晾干，密封室温保存备用。其中，抗人 IgG特异性片段、链单克隆抗体的浓度为lmg/mL，羊抗梅毒抗原(TPN17和TPN47) IgG抗 体由抗TPm7-IgG抗体与抗TPN47-IgG抗体按体积比1 1混合，其终浓度为lmg/mL ；二 者点样量为1 P 1/cm。将已纯化的金标记的梅毒重组抗原TPN17和TPN47以体积比1 1混合后，均勻 地涂于玻璃纤维纸上，在37°C烘干，制备成金结合物垫，密封备用。将固相化的纤维膜与胶 体金结合的玻璃纤维、吸水纸等按一定顺序，通过PVC不干胶底板组合在一起，用切条机切 成一定宽度检测条。把检测条与干燥剂一起装入铝箔袋中，机器封口，密封保存。取待检标本血清10 U L，加样于梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条 加样区，同时滴加100 u L生理盐水，静置20min观察结果。只在梅毒特异性IgG抗体胶体 金免疫层析检测试剂条对照区有一紫红色条带出现，则判为阴性；在检测区及对照区均有 一紫红色条带出现，则判为阳性；加样检测后，检测区和对照区均不出现紫红色条带，为无 效结果(参见图2)。实施例2与实施例1相似，区别在于胶体金垫仅由TPW7组成，不含有TPN47。结果判断与 实施例1相同。实施例3与实施例1相似，区别在于胶体金垫仅由TPN47组成，不含有TPW7。结果判断与 实施例1相同。实施例4与实施例1相似，区别在于待检标本为脑脊液标本，结果判断与实施例1相同。实施例4性能验证试验按实施例1的方案制备梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测 试剂条，然后进行性能验证。1)外观检查白色包被反应膜平整、干净无污染斑点、无裂缝，胶带无开胶，梅毒 特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条宽度在3士0. 1mm，无切斜现象。2)阳性标本符合率50份经FTA-ABS (德国欧蒙公司)检测确定的TP_IgG阳性参 比血清，采用发明的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条检出TP-IgG阳性49 份，阳性标本符合率98%。3)阴性标本符合率50份梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA)(日本富士 株式会社)阴性参比血清，采用发明的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条检
9测未检出阳性标本，阴性标本符合率100%。4)灵敏度检测用卫生部室内质控血清检测，最低检出限度应小于或等于4NCU/ mL，与TPPA(日本富士株式会社)相当。5)批内差异同一批次梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条，用特征 性阳性血清(FTA-ABS(德国欧蒙公司)检测确定的临床标本阳性TP-IgG参比高、中、低血 清)检测，相同滴度检测结果显示色带的颜色深浅一致，阴性血清检测的结果阴性。6)批间差异不同批次梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条，用特征 性阳性血清(FTA-ABS(德国欧蒙公司)检测确定的临床标本阳性TP-IgG参比高、中、低血 清)检测，相同滴度检测结果显示色带的颜色深浅一致，阴性血清检测的结果阴性。7)干扰试验检测结果不受标本溶血(n = 50)、脂血(n = 50)和黄疸(n = 50) 的干扰。8)交叉反应采用本梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条，进行系统 性红斑狼疮(n = 30)、类风湿病(n = 38)、免疫性肝炎(n = 40)等自身免疫系统疾病的检 测，未发现交叉反应。9)稳定性检测将梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条放置37°C 20 天后检测，以上各项指标无显著变化。
权利要求
梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条，其特征在于设有载体板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜、梅毒特异性IgG抗体检测线、对照线和吸收垫；加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一端设在胶体金垫的一端上，胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设在硝酸纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgG抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段γ链单克隆抗体，在对照线处包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体。
2.如权利要求1所述的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条，其特征在于 所述载体板为PVC板。
3.如权利要求1所述的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法， 其特征在于包括以下步骤1)制备梅毒重组抗原TPN17和TPN47采用基因克隆技术，PCR扩增编码梅毒螺旋体抗原的DNA，并插入大肠杆菌中使其表 达，得梅毒重组抗原TPN17和TPN47 ；2)硝酸纤维素膜的点样在硝酸纤维素膜IgG检测线上包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体，在对照线处 包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47IgG抗体，晾干；3)制备胶体金采用柠檬酸三钠还原方法制备25nm胶体金，取氯金酸lmL加入到100mL去离子双 蒸水中，得到的氯金酸浓度为0. 01%，置于带冷凝装置的烧瓶中加热至沸腾，磁力加热搅拌 下加入1 %柠檬酸三钠水溶液2. OmL,继续加热直至溶液呈葡萄酒色为止，冷却后置于棕色 瓶中4°C冰箱保存备用；4)胶体金与TPW7、TPN47的标记胶体金与梅毒特异性抗原TPW7的标记取胶体金10ml，用0. lmol/L NaOH调至 pH5. 4，加 lOOy gTPN17，混勻，放置 5min，加入 5% BSA lml 混勻，4°C、10000r/min 离心 lh, 弃上清，将沉淀用TBS缓冲液溶解至10ml，4°C、10000r/min离心lh，弃上清，沉淀用TBS稀 释至1ml，得胶体金标记的TPN17抗原；胶体金与梅毒特异性抗原TPN47的标记同上操作，得胶体金标记的TPN47抗原；将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混合后，均勻地涂于玻璃纤维 膜上，烘干，制备成胶体金垫；5)制备免疫层析检测条将加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜和吸收垫依次粘贴在载体板上表面，加样垫的一端设 在胶体金垫的一端上，胶体金垫的另一端设在硝酸纤维膜的一端上，吸收垫的一端设在硝 酸纤维膜的另一端上，梅毒特异性IgG抗体检测线和对照线依次设在硝酸纤维膜上；在梅 毒特异性IgG抗体检测线处包被抗人IgG特异性片段Y链单克隆抗体，在对照线处包被羊 抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗体，用切条机切成条状，得梅毒特异性IgG抗体胶体金 免疫层析检测试剂条。
4.如权利要求3所述的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法， 其特征在于在步骤2)中，所述抗人IgG特异性片段、链单克隆抗体的浓度为1 4mg/mL。
5.如权利要求3所述的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法， 其特征在于在步骤2)中，所述羊抗梅毒抗原TPW7和TPN47的IgG抗体由抗TPm7_IgG抗 体与抗TPN47-IgG抗体按体积比1 1混合，其终浓度为1 4mg/mL;三者点样量为lyL/ cm0
6.如权利要求3所述的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法， 其特征在于在步骤3)中，所述柠檬酸三钠的浓度为2%。
7.如权利要求3所述的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法， 其特征在于在步骤4)中，所述将胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原混 合，是胶体金标记的TPN17抗原和胶体金标记的TPN47抗原以体积比1 0. 2 5混合。
8.如权利要求3所述的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条的制备方法， 其特征在于在步骤4)中，所述烘干的温度为37°C。
全文摘要
梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法，涉及一种梅毒特异性IgG抗体检测试剂。提供一种可用于全血、血清、血浆及脑脊液等标本中梅毒特异性IgG抗体检测的梅毒特异性IgG抗体胶体金免疫层析检测试剂条及其制备方法。试剂条设有载体板、加样垫、胶体金垫、硝酸纤维膜、梅毒特异性IgG抗体检测线、对照线和吸收垫。制备梅毒重组抗原TPN17和TPN47硝酸纤维素膜的点样；制备胶体金；胶体金与TPN17、TPN47的标记；制备免疫层析检测条。检测所需标本量极�。恍枰厥庖瞧鳎庋壑苯优卸两峁壹觳饧虮憧焖伲匾煨郧浚槊舳冉细撸既房煽浚杀窘系停τ霉惴�。
文档编号G01N33/532GK101858915SQ20101017912
公开日2010年10月13日 申请日期2010年5月19日 优先权日2010年5月19日
发明者张忠英, 张长弓, 杨天赐, 林丽蓉 申请人:厦门大学附属中山医院
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