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专利名称：一种食品毒力测定的方法
技术领域：
本发明涉及一种毒力测定的方法，具体地说，它是一种用微生物进行食品毒力测定的方法。
在已有技术中，食品的毒力测定所涉及的检测项目较多，对食品中已知毒素的含量或毒素分子的组成或毒素品种的测定等一般采用化学方法；而对食品中未知毒素的毒力测定或总有害物质的综合毒力的测定，则需要用到动物实验。由于动物需要人力、财力和时间去饲养，再者，动物体在实验中对被检物质有消化、吸收的时间过程，因此，动物实验的时间较长、费用较大，而且动物的饲养和管理也很麻烦。随着食品业的发展，食品检测量越来越大，因此，动物实验的缺点也就越来越突出，逐渐引起应用者的重视。到目前为至，仍未见有较好的、能够代替动物实验的方法问世。
本发明的目的是针对已有技术的现状，提供一种用微生物进行食品毒力测定的方法，用以代替动物实验。
实现本发明的思想是选用单细胞真核微生物作为实验对象来代替小动物进行食品的毒力测定。根据科学界分析，单细胞真核微生物与动物体细胞结构非常相似，都是由生物膜、细胞质和细胞核组成，且呼吸作用基本相同。同时，根据毒力测定的动物实验验证，任何物质的毒性都是通过作用于动物体的细胞而使动物体产生病变或死亡的，那么，能够破坏动物体细胞的物质，对单细胞真核微生物也应该同样具有破坏作用。鉴于以上依据，选用与动物细胞非常相似的单细胞真核微生物作毒力测定的实验对象应当是可行的。再者，选用单细胞真核微生物作实验对象具有反应敏捷、快速的特点，因为单细胞比多细胞的接触面大，且在实验中可以与被检物质直接接触，不象动物体要通过消化吸收等作用才能使被检物质到达细胞组织，因此，它对物质毒性的反应速度大大超过动物体。
实现本发明的具体方案是一、选用单细胞真核微生物作为实验对象；二、实验过程包括以下步骤1、根据预初实验选择确定至少三个被检食品的剂量；2、配制液体麦芽汁培养基，并分成多个等量液样，根据所确定的被检食品的剂量对多个等量液样进行分组，并留出一组作对照组；3、在各剂量组和对照组液样中分别加入等量单细胞真核微生物的悬浮菌液，并在各剂量组液样中对应加入相应剂量的被检食品，摇匀；4、将各剂量组和对照组液样在单细胞真核微生物生长条件下培养24小时；5、培养24小时之后，每隔一个时间间隔对各组中的每个液样进行镜检观察一次，并采用美兰染色法检测活细胞数，然后计算得出各组活细胞的统计平均数；6、将各剂量组的活细胞数与对照组进行比较，根据二者活细胞数量的差值来判断被检食品是否有毒和定性确定其毒力的大小。
本发明的方法是通过观察单细胞真核微生物与被检物质接触后发生的毒性反应来确定食品的毒力的。单细胞真核微生物与被检物质最明显的毒性反应是死亡，因此，本发明通过测出的各剂量组和对照组的活细胞数量来审看各剂量组中细胞非正常死亡的情况，用此来判断被检食品是否有毒和定性确定其毒性大小。
本发明的优越在于选用了易培养、反应敏捷、快速的微生物代替小动物作为食品毒力测定的实验对象，并将微生物的实验方法用于食品的毒力测定，这在毒力检测上是一个大胆尝试和突破。它与动物实验相比，要快速、方便、经济的多。该方法的问世，可以将目前大量的用动物进行食品毒力测定的工作变得简单、方便、经济，节省了大量的人力和财力。同时，它还可能为药品的毒力测定特别是保健药品的毒力测定开拓一个新的检测途径。
下面根据检测实例详细说明实验过程。
为了说明问题，在以下实例中选用几种已经由动物实验测定的有害物质，将它们分别加入某种被检食品中，人为地制成含有害物质的被检食品，并用含有害物质浓度的大小代替剂量的大小。实例中浓度的具体数值根据预初实验的结果来选择确定，预初实验的目的与动物实验的一样，是确定实验对象死亡率0％的浓度值和死亡率为100％的浓度值，然后在该浓度值范围之内选择确定三个不同的浓度值来进行实测。其中实验对象均选用单细胞真核微生物的悬浮菌液。
实例1，对牛奶中残留乐果(C5H12O3NPS2)的毒力测定。
制作乐果含量浓度分别为0.005mg/ml、0.02mg/ml和0.03mg/ml的被检牛奶，按常规法配制液体麦芽汁培养基，取十个三角瓶，分别加入100ml液体麦芽汁培养基，留出一个三角瓶作对照， 其余九个三角瓶分成三个浓度组；在无菌条件下， 在十个三角瓶的培养基中加入10ml悬浮菌液，并且在三个浓度组中分别加入浓度为0.005mg/ml、0.02mg/ml、0.03mg/ml的被检牛奶1ml，摇匀；将十个三角瓶在25℃条件下遥床培养24小时；然后每隔两小时对各三角瓶取样镜检观察一次，并采用美兰染色法检测活细胞数，计算得出各组活细胞统计平均值。其结果如下表表中单位乐果含量浓度Nmg/ml；活细胞数n(统计平均数)个数；时间T小时。
通过上表看出，各浓度组的活细胞数大大低于对照组，说明在同样的生长条件下，由于各浓度组的细胞接触了有害物质而不能正常生存，大部分非正常死亡了。因此，可以判定被检物质有毒。
实例2，蔬菜汁中残留亚硫酸钠的毒力测定。
实验过程与实例1相同。其实验结果如下表表中单位亚硫酸钠含量浓度Nppm；活细胞数n(统计平均数)个数；时间T小时。
通过上表看出，各浓度组活细胞数仍是低于对照组。因此，可以判定被检物质有毒。
实例3，酱油中砷的毒力测定。
实验过程与实例1相同。其实验结果如下表
表中单位砷的含量浓度Nmg/l；活细胞数n(统计平均数)个数；时间T小时。
通过上表可以判定被检物质有毒。
实例4，马铃薯中茄碱的毒力测定。
实验过程与实例1相同。其实验结果如下表表中单位茄碱的含量浓度Nmg/l；活细胞数n(统计平均数)个数；时间T小时。
通过上表可以判定被检物质有毒。
实例5，大米中黄曲霉毒素的毒力测定。
实验过程与实例1相同。其实验结果如下表表中单位黄曲霉毒素的含量浓度Nmg/l；活细胞数n(统计平均数)个数；时间T小时。
通过上表可以判定被检物质有毒。
通过以上实例可以得出如下结论1、凡是能使动物出现中毒的物质，也能导致单细胞真核微生物的中毒死亡。
2、在同样的生长条件下，只要各浓度组的活细胞数低于对照组，就可以判定被检食品有毒。
3、各浓度组的活细胞数与对照组的差值越大，则被检物质的毒力就越大；反之，被检物质的毒力就越小。因此，可以定性确定被检物质的毒力的大小。
4、通过上述实例看出，本发明的实验时间为30小时，而动物实验的时间少则15天，多则1～3个月，因此，证实了单细胞真核微生物的反应要比动物敏捷和快速得多。
5、培养单细胞真核微生物所用的经费比饲养动物要少得多。根据实例1计算培养单细胞真核微生物所用的经费为人民币8元，而动物实验则需要小鼠60只，每只为2.3元，实验期为15天，实验期的饲养费用为每只每天0.10元，综合费用为60×2.3元+60×15×0.10元＝228元，因此，本发明比动物实验至少便宜220元。
6、本发明无污染，比动物实验卫生、方便。
权利要求
1.一种食品毒力测定的方法，其特征是1.1、选用单细胞真核微生物作为实验对象；1.2、实验过程包括以下步骤1.2.1、根据预初实验选择确定至少三个被检食品的剂量；1.2.2、配制液体麦芽汁培养基，并分成多个等量液样，根据所确定的被检食品的剂量对多个等量液样进行分组，并留出一组作对照组；1.2.3、在各剂量组和对照组液样中分别加入等量单细胞真核微生物的悬浮菌液，并在各剂量组液样中对应加入相应剂量的被检食品，摇匀；1.2.4、将各剂量组和对照组液样在单细胞真核微生物生长条件下培养24小时；1.2.5、培养24小时之后，每隔一个时间间隔对各组中的每个液样进行镜检观察一次，并采用美兰染色法检测活细胞数，然后计算得出各组活细胞的统计平均数；1.2.6、将各剂量组的活细胞数与对照组进行比较，根据二者活细胞数量的差值来判断被检食品是否有毒和定性确定其毒力的大小。
全文摘要
本发明是一种食品毒力测定的方法。它选用单细胞真核微生物作实验对象,实验步骤包括:配制液体麦芽汁培养基,并根据所确定的被检食品的剂量进行分组,留出一组作对照组;在各组中加入等量单细胞真核微生物的悬浮菌液,并在各剂量组中加入相应剂量的被检食品,摇匀;培养24小时;然后,每隔一个时间间隔进行镜检观察一次,检测活细胞数;再根据各剂量组活细胞数与对照组的差值来判断被检食品是否有毒和定性确定其毒力的大小。
文档编号G01N33/02GK1169534SQ96118709
公开日1998年1月7日 申请日期1996年6月24日 优先权日1996年6月24日
发明者孙悦迎, 张旭东 申请人:孙悦迎