专利名称：骨通贴巴布膏含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种骨通贴巴布膏的质量检测方法，具体地说，是涉及骨通贴巴 布膏中的麻黄含量的测定方法。
背景技术：
骨通贴巴布膏是一种治疗骨关节炎的纯中药制剂，它采用麻黄、当归、三 七、丁公藤、樟脑等十多种中药材精制而成，具有驱风散寒、活血止痛之功能， 可用于局部关节疼痛肿胀、麻木重着等证候。
骨通贴巴布膏含量测定的国家标准是用薄层扫描色谱法测定麻黄的含量， 薄层扫描色谱法具有检测误差较大、重现性较差，受环境和操作的影响大等局 限，己逐渐遭到淘汰。高效液相色谱法具有灵敏度高、分离度好、适用范围广、 稳定性和重现性好、操作简单可行等优点，所以用高效液相色谱法测定要优于 使用薄层扫描色谱法。
发明内容
本发明的目的就是针对用薄层扫描法测定骨通贴巴布膏中麻黄含量存在的 缺陷，提供一种用高效液相一紫外检测器法测定骨通贴巴布膏中主要活性成分 麻黄含量的测定方法，该方法操作简单、测定准确，有助于完善骨通贴巴布膏 的质量标准。
本发明通过以下技术方案实现
--种用高效液相-紫外检测器法测定骨通贴巴布膏中麻黄含量的方法，具体 按下述步骤进行
供试品溶液的制备取本品1 3片，除去盖衬，加氯仿分次洗脱贴膏，合并氯仿液，用盐酸 溶液振摇提取数次，盐酸提取液合并，用氯仿洗涤，弃去氯仿液，用氢氧化钠 的饱和溶液调节pH值至12，用氯仿振摇提取数次，合并氯仿提取液，加入盐酸 乙醇溶液(1—20)适量，混匀，于6(TC减压蒸干，取残渣，溶解后移至10ml量 瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备
取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，制成每lml含10-90yg的溶液， 作为对照品溶液。
测定方法
固定相为C8或ds;流动相为甲醇-乙腈-水，必要时可加入离子对试剂。其
中甲醇的比例为0 60,乙腈的比例为0 40，水的比例为20 100;水相pH为 2 5， pH调节剂为磷酸、醋酸、磷酸盐、醋酸盐、三乙胺、二乙胺中的一种或 几种的组合物，离子对试剂为十二垸基硫酸钠、庚烷磺酸钠；检测波长为 200-220nm。
本发明的优点
本方法进一步推动了骨通贴巴布膏含量分析方法研究和质量标准的完善，并 为工业化生产节约了人力物力，是值得推广的简便易行的好方法。 本发明与现有的薄层扫描法比较，优点有
1. 灵敏度高，测量误差�。�
2. 分离度好；
3. 稳定性和重现性好，受环境和操作影响�。�
4. 用量少；
5. 操作简单。
具体实施方式
实施例1:
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用WatersC18柱(4.6X150咖，5um);流动 相为乙腈-O. 1%磷酸溶液(12:88);检测波长为210nm;流速为lml/min;柱温 室温。进样量20ul;结果保留时间10min;检测限0.6ng;线性范围5.0 60.6ug/ml;精密度1.64免。
供试品溶液的制备取本品2片，除去盖衬，加氯仿100ml分次洗脱贴膏， 合并氯仿液，用1%盐酸溶液振摇提取4次(40、 30、 30、 30ml)，盐酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗涤，弃去氯仿液，用氢氧化钠的饱和溶液调节pH值至12， 用氯仿振摇提取3次，每次50ml，合并氯仿提取液，加入盐酸乙醇溶液(1— 20)3ml，混匀，于60'C减压蒸干，残渣加乙腈-0.1%磷酸溶液(1:1)使溶解，移 至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，取续滤液， 即得。
对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加乙腈-0.1%磷 酸溶液(l:l)制成每lml含10-90u g的溶液，作为对照品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20nl，注入高效液相色谱 仪，记录色谱图，计算即得。
测定结果表明，本法可以方便的测定盐酸麻黄碱的含量，有效的控制制剂 中麻黄的量，方便易行，准确度高，易于操作。 实施例2:
照高效液相色谱法(+国药典2005年版附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用DiscoveryC18柱(4.6X150mm, 5um);
流动相为O. 05mol/L磷酸二氢钾-甲醇-三乙胺(75:25:0. 2);检测波长为207nm;
流速为lml/min;柱温室温。进样量20ul;结果保留时间17min;检测限2. lng;线性范围5.0 60.6ixg/ml;精密度1. 10%。
供试品溶液的制备取本品2片，除去盖衬，加氯仿100ml分次洗脱贴膏， 合并氯仿液，用1%盐酸溶液振摇提取4次(40、 30、 30、 30ml)，盐酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗涤，弃去氯仿液，用氢氧化钠的饱和溶液调节pH值至12, 用氯仿振摇提取3次，每次50ml，合并氯仿提取液，加入盐酸乙醇溶液(1 — 20)3ml,混匀，于6(TC减压蒸干，残渣加流动相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45pm)滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成 每lml含10-90 U g的溶液，作为对照品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20ul，注入髙效液相色谱 仪，记录色谱图，计算即得。
测定结果表明，本法可以方便的测定盐酸麻黄碱的含量，有效的控制制剂 中麻黄的量，方便易行，准确度高，易于操作。 实施例3:
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用Restek C18柱(4.6X150ram, 5um):流 动相为甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲液(用磷酸调pH3.0) (18:82);检测 波长为210nm;流速为lml/min;柱温室温。进样量20ul;结果保留时间 15min;检测限1.8ng;线性范围5. 0 60. 6 u g/ml;精密度1.60%。
供试品溶液的制备取本品2片，除去盖衬，加氯仿100ml分次洗脱贴膏， 合并氯仿液，用1%盐酸溶液振摇提取4次(40、 30、 30、 30ml)，盐酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗涤，弃去氯仿液，用氢氧化钠的饱和溶液调节pH值至12， 用氯仿振摇提取3次，每次50ml，合并氯仿提取液，加入盐酸乙醇溶液(1— 20)3ml，混匀，于60'C减压蒸干，残渣加流动相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，取续滤液，即得。对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成
每lml含10-90 ug的溶液，作为对照品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20U1，注入高效液相色谱
仪，记录色谱图，计算即得。
测定结果表明，本法可以方便的测定盐酸麻黄碱的含量，有效的控制制剂 中麻黄的量，方便易行，准确度高，易于操作。
实施例4:
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VI D)测定。
色谱条件与系统适用性试验用Restek C18柱(4.6X150mm， 5um);流 动相甲醇-乙腈-1%十二烷基硫酸钠溶液(25 : 30 : 45)(冰醋酸调pH值3. 0);检 测波长为210nm;流速为l.ml/min;柱温室温。进样量20ul;结果保留时 间10min;检测限3.5ng;线性范围5. 0 60. 6 y g/ml;精密度1. 30%。
供试品溶液的制备取本品2片，除去盖衬，加氯仿100ml分次洗脱贴膏， 合并氯仿液，用1%盐酸溶液振摇提取4次(40、 30、 30、 30ml),盐酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗涤，弃去氯仿液，用氢氧化钠的饱和溶液调节pH值至12, 用氯仿振摇提取3次，每次50ml,合并氯仿提取液，加入盐酸乙醇溶液(1— 20)3ml，混匀，于60'C减压蒸干，残渣加流动相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45ym)滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备敢盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成 每lml含10-90 " g的溶液，作为对照品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20ul，注入高效液相色谱 仪，记录色谱图，计算即得。
测定结果表明，本法可以方便的测定盐酸麻黄碱的含量，有效的控制制剂 中麻黄的量，方便易行，准确度高，易于操作。 实施例5:
7照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用Restek C18柱(4.6X150mra, 5ym);流 动相乙腈-水(含O. 1%磷酸和0. 1%三乙胺)(10:90);检测波长为210nm;流速 为lml/min;柱温室温。进样量20ul;结果保留时间12min;检测限2.8ng; 线性范围5.0 60.6ug/ml;精密度1.73%。
供试品溶液的制备取本品2片，除去盖衬，加氯仿100ml分次洗脱贴膏， 合并氯仿液，用1%盐酸溶液振摇提取4次(40、 30、 30、 30ml)，盐酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗涤，弃去氯仿液，用氢氧化钠的饱和溶液调节pH值至12， 用氯仿振摇提取3次，每次50ml，合并氯仿提取液，加入盐酸乙醇溶液(1 — 20)3ml，混匀，于6(TC减压蒸干，残渣加流动相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成 每lml含10-90 u g的溶液，作为对照品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20ul，注入高效液相色谱 仪，记录色谱图，计算即得。
测定结果表明，本法可以方便的测定盐酸麻黄碱的含量，有效的控制制剂 中麻黄的量，方便易行，准确度高，易于操作。 实施例6:
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用WatersC18柱(4.6X150ram， 5um);流动 相甲醇-乙腈-1%庚垸磺酸钠(20 : 25 : 55)(冰醋酸调pH值3.2);检测波长为 207nm;流速为lml/min;柱温室温。进样量20ul;结果保留时间14min; 检测限5.8ng;线性范围5.0 60.6ug/ml;精密度2. 50%。
供试品溶液的制备取本品2片，除去盖衬，加氯仿100ml分次洗脱贴膏, 合并氯仿液，用1%盐酸溶液振摇提取4次(40、 30、 30、 30ml)，盐酸提取液合并，用氯仿30 ml洗涤，弃去氯仿液，用氢氧化钠的饱和溶液调节pH值至12， 用氯仿振摇提取3次，每次50ml，合并氯仿提取液，加入盐酸乙醇溶液(1 — 20)3ml，混匀，于60'C减压蒸干，残渣加流动相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45ixm)滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成 每lml含10-90ug的溶液，作为对照品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20ul，注入高效液相色谱 仪，记录色谱图，计算即得。
测定结果表明，本法可以方便的测定盐酸麻黄碱的含量，有效的控制制剂 中麻黄的量，方便易行，准确度高，易于操作。 实施例7:
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VI D)测定。 色谱条件与系统适用性试验用WatersC18柱(4.6X150mm， 5um);流动 相甲醇-O. Olmol/L的醋酸铵溶液(用冰醋酸调pH值3. 0) (20 : 80);检测波长 为207nm;流速为lml/min;柱温室温。进样量20ul;结果保留时间16min; 检测限4.2ng;线性范围&.0 60.6ug/ml;精密度1. 45%。
供试品溶液的制备取本品2片，除去盖衬，加氯仿100ml分次洗脱贴膏， 合并氯仿液，用1%盐酸溶液振摇提取4次(40、 30、 30、 30ml)，盐酸提取液合 并，用氯仿30 ml洗涤，弃去氯仿液，用氢氧化钠的饱和溶液调节pH值至12, 用氯仿振摇提取3次，每次50ml,合并氯仿提取液，加入盐酸乙醇溶液(1 — 20)3ml，混匀，于6(TC减压蒸干，残渣加流动相使溶解，移至10 ml量瓶中， 并用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备取盐酸麻黄碱对照品适量，精密称定，加流动相制成 每lml含10-90 u g的溶液，作为对照品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20ul，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算即得。
测定结果表明，本法可以方便的测定盐酸麻黄碱的含量，有效的控制制剂 中麻黄的量，方便易行，准确度高，易于操作。
以上对本发明所提供的骨通贴巴布膏的含量测定方法进行了详细介绍，本 文中应用了具体个例对本发明的实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是
用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的一般技术人员， 依据本发明的思想，在具体实施方式
及应用范围上均会有改变之处，综上所述， 本说明书不应理解为对本发明的限制。
权利要求
1、一种骨通贴巴布膏中麻黄的含量测定方法，其特征在于用高效液相-紫外检测器法测定骨通贴巴布膏中麻黄的含量。
2、 根据权利要求l所述的骨通贴巴布膏中麻黄的含量测定方法，其样品处 理特征在于按下述步骤进行取本品1 3片，除去盖衬，加氯仿分次洗脱贴膏, 合并氯仿液，用盐酸溶液振摇提取数次，盐酸提取液合并，用氯仿洗涤，弃去氯仿液，用氢氧化钠的饱和溶液调节pH值至12，用氯仿振摇提取数次，合并氯 仿提取液，加入盐酸乙醇溶液(1—20)适量，混匀，于60'C减压蒸干，取残渣， 溶解后移至IO ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45um)滤过， 取续滤液，即得。
3、 根据权利要求1所述的骨通贴巴布膏中麻黄的含量测定方法，其HPLC 方法学特征在于固定相为Cs或d8;流动相为甲醇-乙腈-水，必要时可加入离 子对试剂。其中甲醇的比例为0 60，乙腈的比例为0 40,水的比例为20 100; 水相pH为2 5， pH调节剂为磷酸、醋酸、磷酸盐、醋酸盐、三乙胺、二乙胺 中的一种或几种的组合物，离子对试剂为十二垸基硫酸钠、庚垸磺酸钠；检测 波长为200-220nm。
全文摘要
本发明提供了一种用高效液相—紫外检测器法测定骨通贴巴布膏中麻黄含量的方法。包括供试品溶液的制备，对照品溶液的制备，测定色谱条件等。该方法与现有测定方法相比具有灵敏度高、分离度好、适用范围广、稳定性和重现性好、操作简单可行等优点，有助于完善骨通贴巴布膏的质量标准。
文档编号G01N30/06GK101498691SQ200810020518
公开日2009年8月5日 申请日期2008年2月3日 优先权日2008年2月3日
发明者邹巧根 申请人:邹巧根
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
